Direct RT-qPCR Kit II
Kitbeskrivelse:
◮Direct RT-qPCR Kit, ved hjelp av Foreasy Reverse Transcriptase og Foreasy HS Taq DNA Polymerase utviklet av Foregene, med unik reaksjonsbuffer, gjør dette settet med sterk motstand og kompatibilitet, og det kan teste reaksjonen direkte ved å bruke Foregene Lysis-system som mal.Dette settet kan gjelde for utvikling av nukleinsyredeteksjonssett for covid-19 og andre patogene bakterier.
Beskrivelse
Direct RT-qPCR Kit gir separat pakket RT-qPCR-buffer, høyeffektiv Foreasy HS Taq DNA-polymeraseog Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV),gjør det praktisk for å lage back-end-sett og systemjustering, innen enkel verifisering.
Direct RT-qPCR Kit, ved hjelp av Foreasy Reverse Transcriptase og Foreasy HS Taq DNA Polymerase utviklet av Foregene, med unik reaksjonsbuffer, gjør dette settet med sterk motstand og kompatibilitet, og det kan teste reaksjonen direkte ved å bruke Foregene Lysis-system som mal.Dette settet kan gjelde for utvikling av nukleinsyredeteksjonssett for covid-19 og andre patogene bakterier.
Dette settet kan direkte være en del av IVD-produktet, ved å bruke enkelt og raskt.Den trenger bare enkel verifisering, uten å utvikle seg på nytt.
Spesifikasjoner
500T, 50.000T
Komponenter i sett
| Settets innhold (20 μL reaksjonssystem) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 T | 50 000 T | |
| Foreasy Rverse transkriptase (200 U/μL) | 50 μL×1 | 1 ml× 5 |
| Foreasy HS Taq DNA-polymerase (5 U/μL) | 100 μL×1 | 1 ml×10 |
| 2× Direkte RT-qPCRBuffer | 1 ml × 5 | 500 ml × 1 |
| Instruksjon | 1 | 1 |
Driftstrinn
A: Klargjør mal og reagens
1. Forbered forberedt RNA-mal (det anbefales å bruke Foregene Total RNA Isolation Kit-serien for å ekstrahere og rense RNA-mal) eller prøveknekkingsprodukt (det anbefales å bruke Foregene Lysis-system), spesifikke primere (10 μM) og andre relevante forbruksvarer, instrument.
2. Legg 2× Direct RT-qPCR-buffer, RNase-Free ddH2O og 20× ROX Reference Dye (hvis det er nødvendig) i boksen med is, slik at disse smelter naturlig og blandes forsiktig.
B: Klargjør RT-qPCR-system
Få halve volumet av reaksjonsbuffer til reaksjonssystemet (hvis for eksempel volumet til systemet er 20 μL, må det få 10 μL 2× Direct RT-qPCR-buffer). Tiltilsvarende mengde enzym, det foreslår viM-MLV：10-30 U/20 μL reaksjonssystem,TaqDNA-polymerase:1-2 U/20 μL reaksjonssystemdette er vårt forslag, du bør teste og justere det), tilsett RNA-mal, spesifikke primere og prober, og tilsett RNase-fri ddH2O til 20 μL.Den spesifikke fremstillingen av RT-qPCR-reaksjonssystem kan henvises til følgende tabell 1.
Tabell 1: Klargjøring av RT-qPCR-system
| Komponent | Volum | Sluttkonsentrasjon |
| 2× Direkte RT-qPCR-buffer | 10 μL | 1× |
| Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNA-polymerase | 1-2 U | |
| Forover Primer (10 μM) | 0,8 μL | 50-900nM |
| Reverse Primer (10 μM) | 0,8 μL | 50-900nM |
| Probe (4 μM) | 1 μL | 200nM |
| Mal (RNA eller lysat) | X μL | |
| 20× ROX Reference Dye | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6,4-X) μL | |
| Totalt volum | 20 μL |
Merk: Forward Primer og Reverse Primer er spesifikke primere for målgenet.Systemet til qPCR kan justeres i henhold til praktiske eksperimentelle og PCR-modeller.Vi anbefaler 400nM for den endelige konsentrasjonen av de fleste primere.Juster volumet av spesifikke primere og prober i henhold til den forberedte konsentrasjonen og den anbefalte sluttkonsentrasjonen.
1*: Velg passende sluttkonsentrasjon av ROX Reference Dye i henhold til forskjellige kvantitative PCR-instrumenter.Den optimale ROX Reference Dye-konsentrasjonen for vanlige kvantitative PCR-instrumenter er vist i følgende tabell:
| Kvantitative PCR-instrumenter | Sluttkonsentrasjon av ROX Reference Dye |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/trinn én,etc. | 1× (tilsett for eksempel 1μl 20×ROX Reference Dye i 20 μL reaksjonssystem) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P og Mx4000, etc. | 0,5× (tilsett for eksempel 0,5 μl 20×ROX Reference Dye i 20 μL reaksjonssystem) |
| Roche PCR-instrument, Bio-Rad PCR-instrument, Eppendorf kvantitativt PCR-instrument, etc. | Uten ROX Reference Dye |
Lagring og holdbarhet
Settet skal oppbevares ved -20 ± 5 ℃.Den skal umiddelbart lagres i -20℃ termostatisk kjøleskap.Gyldighetsperioden er 2 år dersom den oppbevares i egnet stand.
