Cell Total RNA Isolation Kit Total RNA Isolation Rensesett fra celle
Kitbeskrivelse:
Høyrenset og høykvalitets total-RNA kan fås fra forskjellige dyrkede celler på 11 minutter.
RNase-fri
Kjøres ved romtemperatur (15-25 ℃)
Med DNA-rensekolonne
Høyt RNA-utbytte
Rask: Fullfør ekstraksjonen på 11 minutter
Sikkerhet: Ingen Organisk kjemikalie
Beskrivelse
Dette settet bruker spinnkolonnen og formelen utviklet av Foregene, som effektivt kan trekke ut høyrent og høykvalitets total-RNA fra celler dyrket i 96, 24, 12 og 6-brønns plater.
Settet gir en effektiv DNA-rensende kolonne, som enkelt kan separere supernatanten og cellelysatet, binde og fjerne genomisk DNA.Operasjonen er enkel og tidsbesparende.
Tkolonnen med kun RNA kan effektivt binde RNA med en unik formel.Et stort antall prøver kan behandles samtidig.
Komponenter i sett
| Sett sammensetning | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 T | 200 T | |
| Buffer cRL1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffer cRL2 | 15 ml | 60 ml |
| Buffer RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffer RW2 | 24 ml | 96 ml |
| RNase-fri ddH2O | 10 ml | 40 ml |
| RNA-bare kolonne | 50 | 200 |
| DNA-rensekolonne | 50 | 200 |
| Instruksjon | 1 | 1 |
*Vennligst bruk hansker og ta beskyttelsestiltak under operasjonen da Buffer cRL1 og Buffer RW1 inneholder irriterende kaotropiske salter.
Egenskaper og fordeler
■ Hele prosessen drives ved romtemperatur (15-25 ℃), uten isbad og lavtemperatursentrifugering.
■ Hele settet er RNase-fritt, du trenger ikke bekymre deg for RNA-nedbrytning.
■ DNA-rensekolonne binder DNA spesifikt, slik at settet kan fjerne genomisk DNA-kontaminering uten å legge til ytterligere DNase.
■ Høyt RNA-utbytte: Kun RNA-kolonne og unik formel kan effektivt rense RNA.
■ Rask hastighet: enkel å betjene og kan gjennomføres på 11 minutter.
■ Sikkerhet: Ingen organisk reagens er nødvendig.
■ Høy kvalitet: Det rensede RNA er av høy renhet, fri for protein og andre urenheter, og kan møte ulike etterfølgende eksperimenter.
Påføring av sett
Den er egnet for ekstraksjon og rensing av totalt RNA fra dyrkede celler i 96, 24, 12 og 6-brønns plater.
Arbeidsflyt
Diagram
Agarosegelbatteridiagrammet til Cell Total RNA Isolation Kit behandlet de ovennevnte forskjellige antall celler, 20μl volumeluering, ta 2μl renset total RNA 1%.
Lagring og holdbarhet
Settet kan lagres i 12 måneder ved romtemperatur (15–25 ℃) eller 2–8 ℃ i lengre tid (24 måneder).
Buffer cRL1 kan lagres ved 4 ℃ i 1 måned etter tilsetning av 2-hydroksy-1-etantiol (valgfritt).
RNA ekstraheres ikke eller RNA-utbyttet er lavt
Det er ofte en rekke faktorer som påvirker utvinningseffektiviteten, for eksempel: RNA-innhold i vevsprøve, operasjonsmetode, elueringsvolum, etc.
1. Isbad eller kryogen (4 °C) sentrifugering ble utført under drift.
Anbefaling: Kjør ved romtemperatur (15-25 ° C) gjennom hele prosessen, ikke isbad og sentrifuger ved lave temperaturer.
2. Feil prøvekonservering eller overdreven prøvelagringstid.
Anbefaling: Oppbevar prøver ved -80 °C eller frys ned i flytende nitrogen og unngå gjentatt bruk av fryse-tine;prøv å bruke friskt vev eller dyrkede celler for RNA-ekstraksjon.
3. Utilstrekkelig prøvelysering.
Anbefaling: Ved homogenisering av vev, sørg for at vevet er tilstrekkelig homogenisert og at vevscellene er tilstrekkelig delt til å forklare frigjøringen av RNA.
4. Eluenten er ikke tilsatt riktig.
Anbefaling: Bekreft at RNase-Free ddH2O tilsettes dråpevis til midten av rensekolonnemembranen.
5. Riktig volum absolutt etanol ble ikke tilsatt buffer RL2 eller buffer RW2.
Anbefaling: Følg instruksjonene, tilsett riktig volum absolutt etanol til Buffer RL2 og Buffer RW2 og bland godt før du bruker settet.
6. Dosering av vevsprøve er ikke hensiktsmessig.
Anbefaling: Bruk 10-20 mg vev eller (1-5) × 106celler per 500 μl buffer RL1, da overdreven bruk av vev kan resultere i redusert RNA-ekstraksjon.
7. Feil elueringsvolum eller ufullstendig eluering.
Anbefaling: Elueringsvolumet til rensekolonnen er 50-200 μl;hvis elueringseffekten ikke er tilfredsstillende, anbefales det å forlenge plasseringstiden i romtemperatur etter tilsetning av forvarmet RNase-Free ddH2O, f.eks. i 5-10 min.
8. Rensekolonnen har etanolrester etter buffer RW2-vask.
Anbefaling: Hvis det er etanolrester etter vask av buffer RW2, sentrifugering av tomme rør i 1 min, kan tiden for sentrifugering med tomme rør økes til 2 minutter, eller rensekolonnen kan plasseres ved romtemperatur i 5 minutter for å fjerne gjenværende etanol på en tilstrekkelig måte.
Renset RNA brytes ned
Kvaliteten på det rensede RNA er relatert til faktorer som bevaring av prøven, RNase-kontaminering og manipulasjon, etc.
1. Vevsprøver oppbevares ikke i tide.
Anbefaling: Hvis vevsprøver eller celler ikke brukes i tide etter innsamling, kryooppbevares umiddelbart ved -80 °C eller flytende nitrogen.For å trekke ut RNA, bruk en nylig tatt vev eller celleprøve når det er mulig.
2. Gjentatt fryse-tining av vevsprøver.
Anbefaling: Ved oppbevaring av vevsprøver er det best å kutte dem i små biter for konservering, og fjerne en av bitene ved bruk for å unngå gjentatt fryse-tining av prøven og nedbrytning av RNA.
3. RNase introduseres eller ikke bruker engangshansker, masker osv. under operasjonen.
Anbefaling: RNA-ekstraksjonseksperimenter utføres best i separate RNA-manipulasjonsrom og bordet ryddes før eksperimentet.
Bruk engangshansker og -masker under eksperimentet for å minimere RNA-nedbrytning forårsaket av introduksjon av RNase.
4. Reagenser er kontaminert med RNase under bruk.
Anbefaling: Bytt ut med et nytt Animal Total RNA Isolation Kit for relaterte eksperimenter.
5. Sentrifugerørene, spissene osv. som brukes i RNA-manipulering er kontaminert med RNase.
Anbefaling: Bekreft at sentrifugerørene, spissene, pipettene osv. som brukes i RNA-ekstraksjon, alle er RNase-frie.
Renset oppnådd RNA påvirker nedstrøms eksperimenter
RNA renset av rensekolonnen, hvis saltionene, proteininnholdet er for stort, vil påvirke nedstrømseksperimentet, for eksempel: omvendt transkripsjon, Northern Blot et al.
1. Det eluerte RNA har saltionrester.
Anbefaling: Bekreft at riktig volum av etanol er tilsatt buffer RW2 og utfør 2 rensekolonnevasker ved sentrifugalhastigheten som er angitt for drift;hvis det er rester av saltioner, la rensekolonnen stå i buffer RW2 i 5 minutter ved romtemperatur og utfør sentrifugering for å maksimere fjerning av saltforurensning.
2. Etanolrest i eluert RNA.
Anbefaling: Bekreft at etter vask av buffer RW2, utfør sentrifugeringsoperasjonen med tomme rør ved sentrifugeringshastigheten som er angitt for drift, øk tiden for sentrifugering med tomme rør til 2 minutter hvis det fortsatt er etanolrester, eller la det stå i romtemperatur i 5 m
