Plant Total RNA Isolation Kit Plus Total RNA Purificaiton Kit for Plant rik på polysakkarider og polyfenoler
Kitbeskrivelse:
Kat.nr. RE-05021/05022/05024
For rensing av totalt RNA fra generelle planteprøver som inneholder høye polysakkarid- og polyfenolkomponenter.
Trekk raskt ut total-RNA av høy kvalitet fra planteprøver med høyt innhold av polysakkarider og polyfenoler.
RNase-fri ved bruk av DNA-rensekolonne
Enkelt – alle operasjoner utføres ved romtemperatur
Rask – operasjonen kan fullføres på 30 minutter
Trygg – ingen organisk reagens brukes 
Spesifikasjoner
50 forberedelser, 200 forberedelser
Settet bruker spinnkolonnen og formelen utviklet av Foregene, som effektivt kan trekke ut høyrent og høykvalitets total-RNA fra ulike plantevev med høyt innhold av polysakkarider eller polyfenoler.Den gir DNA-rengjøringskolonnen som enkelt kan fjerne genomisk DNA fra supernatanten og vevslysatet.RNA-bare kolonne kan effektivt binde RNA.Settet kan behandle et stort antall prøver samtidig.
Hele systemet inneholder ikke RNase, så det rensede RNA vil ikke bli degradert.Buffer PRW1 og Buffer PRW2 kan sikre at det oppnådde RNA ikke er forurenset av protein, DNA, ioner og organiske forbindelser.
Komponenter i sett
| Buffer PSL1, Buffer PS, Buffer PSL2 |
| Buffer PRW1, Buffer PRW2 |
| RNase-fri ddH2O, DNA-rensekolonne |
| RNA-bare kolonne |
Egenskaper og fordeler
■ Drift ved romtemperatur (15-25 ℃) gjennom hele prosessen, uten isbad og lavtemperatursentrifugering.
■ Komplett sett RNase-fri, ingen grunn til å bekymre deg for RNA-nedbrytning.
■ Spesielt egnet for rensing av RNA fra planteprøver av polysakkarider og polyfenoler.
■ DNA-rensekolonne binder seg spesifikt til DNA, slik at settet kan fjerne genomisk DNA-kontaminering uten å tilsette DNase.
■ Høyt RNA-utbytte: Kun RNA-kolonne og unik formel kan effektivt rense RNA.
■ Rask hastighet: enkel å betjene og kan gjennomføres innen 30 minutter.
■ Sikkerhet: ingen organisk reagens er nødvendig.
■ Høy kvalitet: De rensede RNA-fragmentene er av høy renhet, fri for protein og andre urenheter, og kan møte ulike nedstrøms eksperimentelle applikasjoner.
Produktparametere
■ Nedstrømsapplikasjoner: førstestrengs cDNA-syntese, RT-PCR, molekylær kloning, Northern Blot, etc.
■ Prøve: Ferskt eller frossent plantevev av polysakkarider og polyfenoler
■ Dosering: 50mg plantevev
■ Maksimal RNA-bindingskapasitet for rensekolonnen: 80 μg
■ Elueringsvolum: 50-200 μl
Påføring av sett
Den er egnet for ekstraksjon og rensing av totalt RNA fra ferske eller frosne plantevevsprøver (spesielt ferskt plantebladvev) med høyt innhold av polysakkarid og polyfenol.
Arbeidsflyt
Diagram
Plant Total RNA Isolation Kit Plus behandlet 50 mg friske blader av polysakkarider og polyfenoler, og 5 % renset RNA ble testet ved elektroforese.
1: Banan
2: Ginkgo
3: Bomull
4: Granateple
Lagring og holdbarhet
Dette settet kan lagres i 24 måneder under tørre forhold ved romtemperatur (15-25 ℃);hvis den må lagres over lengre tid, kan den lagres i 2–8 ℃.
Buffer PSL1 kan plasseres ved 4 ℃ i 1 måned etter tilsetning av β-merkaptoetanol (det anbefales å legge det til samtidig med eksperimentet).
Kolonnen plugget
Etter at kolonnen er plugget, er RNA-utbyttet redusert eller til og med umulig å rense RNA, og den oppnådde RNA-massen er lav.
Vanlig årsaksanalyse:
1. Prøvepauser er ikke grundige.
Prøvebrudd forårsaker ikke fullstendig blokkering av DNA-RENSEKOLONNE, samtidig som det påvirker RNA-utbytte og -kvalitet.Vi anbefaler rask slipeoperasjon i tilstrekkelig flytende nitrogen når du knuste prøvene. Prøv å knuse prøvecelleveggen, cellemembranen og annet vev.For planteprøver av polyolpolysakkarider anbefaler vi at du bruker Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.
2. Når den separerte prøvesupernatanten suges med DNA-rensekolonne, kan det mulige cellefragmenterte bunnfallet inhaleres.
De cellefragmenterte sedimentene som tas vil forårsake RNA-KUN-kolonnen som vil bli blokkert når RNA-adsorpsjonsoperasjonen utføres (se trinn 6).Vi anbefaler at du nøye suger denne supernatanten for å unngå at celleavfall blir sugd.
3. Innledende prøvemengde er for mye.
Overdreven prøvebruk vil resultere i ufullstendig prøvefragmentering eller ufullstendig cellelyse av buffer PSL1, noe som resulterer i blokkering av rensekolonnen under rensing.Plant Total RNA Isolation Kit Hver enkelt renset driftsprøve er 50 mg.For planteprøver av polyolpolysakkarider anbefaler vi at du prøver Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.
4. Temperaturen på sentrifugen er for lav.
Hele RNA-isolerings- og renseprosessen utføres ved romtemperatur (20-25°C), bortsett fra at prøvevevet brytes av flytende nitrogen. Temperaturen på noen kryogene sentrifuger er lavere enn 20 grader℃, som kan forårsake blokkering av DNA-rensende kolonne og/eller RNA-bare kolonne.Hvis dette skjer, sett sentrifugetemperaturen til 20-25℃, ogsørg for at lyseringsblandingen og/eller den etanoltilsatte supernatanten ble forvarmet til 37°C.
Ingen RNA ekstrahert eller RNA-utbyttet er lavt
Det er vanligvis mange faktorer som påvirker utvinningseffektiviteten, for eksempel: prøve-RNA-innhold, operasjonsmetode, elueringsvolumet, etc.
Analyse av vanlige årsaker som nedenfor:
1. Et isbad eller lavtemperatur (4°C) sentrifugering ble utført under operasjonen.
Forslag: Kjør ved romtemperatur (15-25°C) i hele prosessen, ikke gjør isbad og lavtemperatursentrifugering.
2. RNA har blitt degradert på grunn av feil konservering av prøven eller langtidskonservering av prøven.
Anbefaling: Fersk innsamlede prøver bør raskt fryses i flytende nitrogen, og deretter lagres ved -80°C i lang tid, unngå gjentatt frysing og tining av prøver;eller umiddelbart suge prøvene i RNA-stabilisator RNAlater-løsning (dyreprøver).
3.Utilstrekkelig prøvefragmentering og lysis fører til blokkering av rensekolonnen.
Forslag: Når du maler vevet, sørg for at vevet er tilstrekkelig malt, og overfør det raskt til den forhåndsforberedte bufferen PSL1 (bekreft at riktig andel av β-ME er tilsatt, se trinn 1 i prosedyren).
4. Eluenten ble tilsatt feil.
Forslag: Sørg for at RNase-Free ddH2O dryppes inn i midten av rensekolonnemembranen.
5. Riktig volum av absolutt etanol ble ikke tilsatt buffer PSL2 eller buffer PRW2.
Forslag: Følg instruksjonene, tilsett riktig volum absolutt etanol til Buffer PSL2 og Buffer PRW2 og bland godt før settet brukes.
6. Mengden vevsprøve er upassende.
Forslag: Bruk 50 mg vev per 500 μl buffer PSL1.Bruk av for mye vev vil redusere mengden RNA ekstrahert og renheten til det resulterende RNA vil også reduseres.Vi anbefaler på det sterkeste at den første prøvedosen ikke bør overstige 50 mg per RNA-ekstraksjon.
7. Upassende elueringsvolum eller ufullstendig eluering.
Forslag: Elueringsvolumet i rensekolonnen er 50-200 μl;hvis elueringseffekten ikke er tilfredsstillende, anbefales det å forlenge tiden ved romtemperatur etter tilsetning av forvarmet RNase-Free ddH2O, slik som 5-10min.
8. Rensekolonnen har etanolrester etter vask med BufferPRW2.
Forslag: Hvis det tomme røret sentrifugeres i 1 min og det fortsatt er etanol igjen etter vask i Buffer PRW2, kan du øke tiden for sentrifugering av tomme rør til 2 minutter, eller plassere rensekolonnen ved romtemperatur i 5 minutter for å fjerne gjenværende etanol fullstendig.
9. Settet ble brukt feil.
Forslag: For planteprøver av polyfenoliske polysakkarider kan det hende at bruk av vanlige sett som Plant Total RNA Isolation Kit ikke kan oppnå ideelle RNA-prøver.Vi anbefaler deg å bruke Plant Total RNA IsolationKit Plus, som er spesialdesignet for polyfenoliske polysakkaridplanteprøver.Et sett spesielt utviklet for å ekstrahere RNA fra polyfenol- og polysakkaridplanteprøver.
OD260/OD280-verdien er lav
RNA-eluering med ddH2O og brukt til spektrofotometeravlesninger resulterer i lave OD260/OD280-verdier.Vi anbefaler å bruke 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 (i stedet for RNase-fri ddH2O for å eluere RNA) for å oppnå relativt korrekte OD260/OD280-verdier, se "RNA-konsentrasjons- og renseanalyser" på side 19.
Det rensede RNA brytes ned
Kvaliteten på renset RNA er relatert til faktorer som prøvekonservering, RNase-kontaminering og manipulasjon.
Analyse av vanlige årsaker:
1. Vevsprøver ble ikke lagret i tide etter innsamling.
Anbefaling: Hvis vevsprøvene ikke brukes i tide etter innsamling, vennligst oppbevar dem i flytende nitrogen ved lav temperatur umiddelbart eller overfør dem til -80°C for langtidslagring etter hurtigfrysing i flytende nitrogen, eller dypp prøvene umiddelbart i RNA-stabilisator RNAlater-løsning (dyreprøver ).For RNA-ekstraksjon, prøv å bruke ferske innsamlede vevsprøver.
2.Gjentatt frysing og tining av vevsprøver.
Forslag: Ved oppbevaring av vevsprøver er det best å kutte dem i små biter for konservering, og ta ut en del av dem ved bruk for å unngå nedbrytning av RNA forårsaket av gjentatt frysing og tining av prøvene.
3.RNase introduseres i operasjonsrommet eller ikke-brukte engangshansker, masker, etc.
Forslag: RNA-ekstraksjonsforsøk utføres best i separate RNA-operasjoner, og laboratoriebordet bør rengjøres før forsøket, og engangshansker og -masker bør brukes under forsøket for å unngå RNA-nedbrytning forårsaket av introduksjon av RNase i størst grad.
4.Reagensen er kontaminert av RNase under bruk.
Forslag: Bytt ut med en ny serie med plante-total-RNA-ekstraksjonssett for relaterte eksperimenter.
5. Sentrifugerørene og pipettespissene som brukes til RNA-manipulering er forurenset med RNase.
Forslag: Sørg for at sentrifugerørene, pipettespissene, pipettene osv. som brukes i RNA-ekstraksjon, alle er RNase-frie.
Bruksanvisninger:
Plant Total RNA Isolation Kit Plus instruksjonshåndbok
