Det lave forholdet mellom A260/A230 er vanligvis forårsaket av urenheter med maksimal absorpsjonsbølgelengde ved 230 nm.La oss se hva disse urenhetene inkluderer:

• Vanlige forurensninger	Absorpsjonsbølgelengde	Forholdseffekt
  Protein	~230nm og 280nm	Samtidig reduksjon av A260/A 280og A260/A 280forholdstall
  Guanidinsalt	220-240 nm	Reduser A260/A 280forhold
  Fenol	~270nm	-
  Trizol	~230nm og 270nm	Reduser A260/A 280forhold
  EDTA	~230nm	Reduser A260/A 280forhold
  Etanol	230-240 nm	Reduser A260/A 280forhold

 
 
 
Absorpsjonsbølgelengde og kontrastverdi for vanlige forurensninger

Protein forurensning
Proteinforurensning kan betraktes som den vanligste forurensningen i nukleinsyreekstraksjonsprosessen.Protein eksisterer mellom den øvre vannfasen og den nedreorganiskfase.Forurensning vil redusere forholdet mellom A260/A280 og A260/A230 samtidig, og forholdet mellom A260/A230 vil endre seg tydeligere enn forholdet til A260/A280.
Under påfølgendeomvendt transkripsjonor qPCR-reaksjoner, proteinrester kan hemme eller forstyrre enzymfunksjonen.Den beste måten å unngå proteinforurensning på er å huske på prinsippet om "snarere mindre enn mer, en liten mengde mange ganger" når du aspirerer supernatanten.

2. Guanidinium forurensning
hydroklorid (GuHCl) og guanidintiocyanat (GTC) har effekten av å denaturere proteiner, som raskt kan ødelegge cellemembraner under nukleinsyreekstraksjonsprosessen, og forårsake proteindenaturering og utfelling.Absorpsjonsbølgelengden til GuHCl og GTC er mellom 220-240 nm, oggjenværende guanidiniumsalt vil redusere forholdet A260/A230.Selv om det gjenværende guanidiniumsaltet vil redusere forholdet,virkningen på nedstrømseksperimenter er faktisk ubetydelig.

3. Trizol forurensning
Hovedkomponenten i Trizol er fenol.Fenols hovedfunksjon er å lysere celler og frigjøre proteiner og nukleinsyrestoffer i cellene.Selv om fenol effektivt kan denaturere proteiner, kan det ikke fullstendig hemme RNase-aktivitet.Derfor tilsettes 8-hydroksykinolin, guanidin isotiocyanat, β-merkaptoetanol, etc. til TRIzol for å hemme endogen og eksogen RNase.
Ved ekstrahering av cellulært RNA kan Trizol raskt lysere cellene og hemme nukleasen som frigjøres fra cellene, og gjenværende Trizol vil redusere forholdet mellom A260/A230 betydelig.
Bearbeidingsmetode: Ved sentrifugering må det bemerkes at fenolen i Trizol er lett løselig i vannfasen under 4° og romtemperatur.

4. Etanolrester
Etanol brukes i sluttprosessen for å utfelle DNAet mens det løser opp saltioner som kan være bundet til DNA.Absorpsjonsbølgelengden til den høyesteabsorpsjonstopp avetanol er også ved 230-240 nm, somvil også redusere forholdet A260/A230.
Metoden for å unngå etanolrester kan gjentas to ganger under den endelige elueringen, og blåser innavtrekkshettei to minutter for å la etanolen fordampe fullstendig før buffer tilsettes for eluering.
Imidlertid bør det være kjent at forholdet bare er en evalueringsindeks for RNA-kvalitet.Dersom ovennevnte operasjoner er strengt regulert, vil ikke avviket mellom forholdet og standardområdet ha stor betydning for nedstrøms forsøk.
Relaterte produkter:
Animal Total RNA isolasjonssett
Plant Total RNA isolasjonssett
Cell Total RNA-isolasjonssett
Plant Total RNA Isolation Kit Plus