Buccal vattpinne/FTA-kort DNA-isolasjonssett Genomisk DNA-ekstraksjon eller rensesett fra Buccal Swabs
Kitbeskrivelse:
Rens raskt høykvalitets genomisk DNA fra bukkal vattpinne/FTA-kortprøver.
◮Ingen RNase-kontaminering:Den DNA-bare kolonnen levert av settet gjør det mulig å fjerne RNA fra det genomiske DNA uten å tilsette RNase under eksperimentet, og forhindrer at laboratoriet blir kontaminert av eksogen RNase.
◮Rask hastighet:Foregene Protease har høyere aktivitet enn tilsvarende proteaser, og fordøyer vevsprøver raskt;operasjonen er enkel, og den genomiske DNA-ekstraksjonsoperasjonen kan fullføres i løpet av 20-80 minutter.
◮Beleilig:Sentrifugeringen utføres ved romtemperatur, og det er ikke behov for 4°C lavtemperatursentrifugering eller etanolutfelling av DNA.
◮Sikkerhet:Ingen organisk reagensekstraksjon er nødvendig.
◮Høy kvalitet:Det ekstraherte genomiske DNA har store fragmenter, ingen RNA, ingen RNase og ekstremt lavt ioneinnhold, som kan oppfylle kravene til ulike eksperimenter.
◮Mikroelueringssystem:Det kan øke konsentrasjonen av genomisk DNA, noe som er praktisk for nedstrøms deteksjon eller eksperimenter.
Beskrivelse
Dette settet gir en effektiv og rask metode for å oppnå høykonsentrasjon av genomisk DNA fra bukkale vattpinner og FTA-kort (blodflekker).Bruker selskapet vårt's unike DNA-bare silikamembran-spinnkolonne og formel, kombinert med Foregene Protease, høykonsentrasjon, høykvalitets genomisk DNA kan ekstraheres på 80 minutter.Den spesialdesignede lille rensekolonnen binder genomisk DNA, og DNA kan elueres med en liten mengde (15μl) elueringssystem for å øke konsentrasjonen av det oppnådde genomiske DNA, noe som er praktisk for nedstrøms deteksjon eller eksperiment.Settet kan behandle én eller flere prøver om gangen, og renseprosessen krever ikke ekstraksjon av organiske stoffer som fenol, kloroform og tidkrevende isopropanol- eller etanolutfelling, og operasjonen er enkel og tidsbesparende.
Spesifikasjoner
50 forberedelser
Komponenter i sett
| Buffer ST1 |
| Buffer ST2 |
| Lineær akrylamid |
| Buffer PW |
| Buffer WB |
| Buffer EB |
| Foregene Protease |
| Bare DNA-kolonne |
| Bruksanvisning |
Egenskaper og fordeler
-Ingen RNase-kontaminering: Den DNA-bare kolonnen som leveres av settet gjør det mulig å fjerne RNA fra genomisk DNA uten å tilsette RNase under eksperimentet, og unngår at laboratoriet blir kontaminert av eksogen RNase.
-Rask hastighet: Foregene Protease har høyere aktivitet enn lignende proteaser, fordøyer prøver raskt;enkel operasjon.
-Praktisk: Sentrifugeringen utføres ved romtemperatur, og det er ikke behov for 4°C lavtemperatursentrifugering eller etanolutfelling av DNA.
-Sikkerhet: Ingen organisk reagensekstraksjon er nødvendig.
-Høy kvalitet: Det ekstraherte genomiske DNA har store fragmenter, ingen RNA, ingen RNase og ekstremt lavt ioneinnhold, som kan oppfylle kravene til ulike eksperimenter.
-Mikro-elueringssystem: Det kan øke konsentrasjonen av genomisk DNA, noe som er praktisk for nedstrøms deteksjon eller eksperiment.
Påføring av sett
Den er egnet for rensing av genomisk DNA fra følgende prøver: bukkale vattpinner, FTA-kort (blodflekker).
Lagring og holdbarhet
-Dette settet kan lagres i 12 måneder under tørre forhold ved romtemperatur (15-25°C);hvis den skal lagres over lengre tid, kan den oppbevares ved 2-8°C.
Merk: Hvis den lagres ved lav temperatur, er løsningen utsatt for nedbør.Før bruk, sørg for å plassere løsningen i settet ved romtemperatur i en periode.Om nødvendig, forvarm den i et 37°C vannbad i 10 minutter for å løse opp bunnfallet, og bland det før bruk.
-Foregene Protease-løsning har en unik formel, som er aktiv når den lagres i romtemperatur i lang tid (3 måneder);dens aktivitet og stabilitet vil være bedre når den lagres ved 4°C, så det anbefales å oppbevare den ved 4°C, husk å ikke oppbevare den ved -20°C.
Rensekolonnen er tilstoppet
I dette settet, i den genomiske DNA-ekstraksjonsoperasjonen, adsorberes rensekolonnen direkte på prøvens enzymatiske lyseringsblanding uten sentrifugeringstrinn, og rensekolonnen kan blokkeres på grunn av ufullstendig enzymisering og høy viskositet av prøven.
Følgende mulige årsaker er som følger:
1. Ufullstendig enzymatisk fordøyelse av vevsprøver.
Anbefaling: Prøvebehandlingstiden til Foregene Protease kan forlenges på passende måte, eller supernatanten kan tas etter sentrifugering ved 12 000 rpm (~13 400 × g) i 5 minutter.
2. Overdreven bruk av vevsprøver eller store vev.
Anbefaling: Det er best å ikke overstige 1 bukkal vattpinne i prøven;hvis prøven er for stor, øk dosen av Buffer ST1, Foregene Protease, buffer ST2 tilsvarende.
3. Prøvens viskositet er for høy.
Anbefaling: Prøver kan fortynnes passende med 10 mM Tris-HCl før genomisk DNA-ekstraksjon.
4. Fragmenter av blodkortet har blitt sugd.
Anbefaling: Den forbigående sentrifugeringstiden i trinn 6 av blodflekk (FTA-kort) genomisk ekstraksjon kan forlenges på passende måte.
Lavt utbytte eller ingen DNA
Det er ofte en rekke faktorer som påvirker genomisk DNA-utbytte, inkludert prøveopprinnelse, prøvelagringsforhold, prøvepreparering, manipulering, etc.
Genomisk DNA kan ikke oppnås under ekstraksjon
De mulige årsakene er som følger:
1. Feil bevaring av prøver eller lagring for lenge fører til genomisk DNA-nedbrytning.
Anbefaling: Orale vattpinner bør fortrinnsvis være nyprøvede, og det er ikke tilrådelig å bruke konserverte vattpinner for genomiske DNA-ekstraksjonsoperasjoner;blodflekkprøver skal sikre at kvaliteten er kvalifisert og lagringstiden bør ikke være for lang.
2. For lite bruk av vev kan føre til ingen ekstraksjon av det tilsvarende genomiske DNA.
Anbefaling: Følg instruksjonene for prøvetaking av bukkal vattpinne i operasjonsveiledningen, og tørk av så mange ganger som mulig slik at nok celler kan festes til den orale vattpinne for genomisk DNA-ekstraksjon;for ekstraksjon av blodflekker kan området for blodflekksskjæring økes på passende måte.
3. Foregene Protease er feil bevart, noe som resulterer i en reduksjon i aktiviteten eller inaktivering.
Anbefaling: Bekreft lagringsbetingelsene til Foregene Protease eller erstatt den med en ny Foregene Protease for enzymatisk reaksjon.
4. Feil oppbevaring av settet eller lagringstiden er for lang, noe som resulterer i feil på enkelte komponenter i settet.
Anbefaling: Kjøp et nytt DNA-isoleringssett for bukkal vattpinne for relaterte prosedyrer.
5. Buffer WB tilsetter ikke absolutt etanol.
Anbefaling: Bekreft at buffer WB tilsetter riktig volum av absolutt etanol.
6. Eluenten er ikke riktig tilsatt silikonfilmen.
Anbefaling: Tilsett 65 °C forvarmede elueringsdråper til midten av silikonmembranen og la stå i romtemperatur i 5 minutter for å øke elueringseffektiviteten.
Lavutbytte genomisk DNA isolert
Følgende mulige årsaker er som følger:
1. Feil bevaring av prøver eller lagring for lenge fører til genomisk DNA-nedbrytning.
Anbefaling: Orale vattpinner er fortrinnsvis ferske, og konserverte vattpinner bør ikke brukes til genomisk DNA-ekstraksjon.
2. Hvis mengden vevsprøve er for liten, vil det ekstraherte genomiske DNA-innholdet være mindre.
Anbefaling: Følg instruksjonene for prøvetaking av oral vattpinne i bruksveiledningen, og tørk av så mange ganger som mulig slik at nok celler kan festes til den orale vattpinne for genomisk DNA-ekstraksjon.
3. Foregene Protease er feil bevart, noe som resulterer i en reduksjon i aktiviteten eller inaktivering.
Anbefaling: Bekreft lagringsbetingelsene til Foregene Protease eller erstatt den med en ny Foregene Protease for enzymatisk reaksjon.
4. Elueringsproblemer.
Anbefaling: Bruk buffer EB for eluering;hvis du bruker ddH2O eller andre elueringsmidler, bekreft at pH i eluatet er mellom 7,0-8,5.
5. Eluatet er ikke riktig tilsatt dråpevis.
Anbefaling: Tilsett elueringsdråper til midten av silikonmembranen og la stå i romtemperatur i 5 minutter for å øke elueringseffektiviteten.
6. Elueringsvæsken samler seg for lite.
Anbefaling: Bruk elueringsmiddel for genomisk DNA-eluering som påkrevd i instruksjonene, minst ikke mindre enn 15 μl.
Lav renhet av genomisk DNA isolert
Lav genomisk DNA-renhet kan føre til feil eller utilfredsstillende resultater av nedstrøms eksperimenter, slik som: enzymer kan ikke kuttes opp, PCR kan ikke få genfragmentet av interesse, etc.
De mulige årsakene er som følger:
1. Heteroproteinforurensning, RNA-forurensning.
Analyse: Rensekolonnen ble ikke vasket med buffer PW;Buffer PW vaskerensekolonnen ble ikke vasket med riktig sentrifugalhastighet.
Anbefaling: Sørg for at det ikke er noen utfelling i supernatanten før du tilsetter etanol;sørg for å vaske rensekolonnen i henhold til instruksjonene, og dette trinnet kan ikke utelates.
2. Urenhet ionforurensning.
Analyse: Buffer WB vaskerensekolonne ble utelatt eller vasket bare én gang, noe som resulterte i gjenværende ionisk forurensning.
Anbefaling: Sørg for å vaske Buffer WB 2 ganger som anvist for å fjerne gjenværende ioner så mye som mulig.
3. RNA-enzymkontaminering.
Analyse: Fremmede RNaser ble tilsatt til buffer;Buffer PW-vaskeoperasjonen var feil, noe som resulterte i RNase-rester, som påvirket nedstrøms RNA-eksperimentelle operasjoner, for eksempel in vitro-transkripsjon.
Anbefaling: Foregene-seriens nukleinsyreisoleringssett kan fjerne RNA uten ytterligere tilsetning av RNase, og dermed trenger ikke bukkal vattpinne/FTA-kort DNA-isolasjonssett tilsettes RNase;sørg for å følge instruksjonene for buffer PW vaskerensekolonnen, og dette trinnet kan ikke utelates.
4. Etanolrest.
Analyse: Buffer WB utførte ikke sentrifugering med tomme rør etter vask av rensekolonnen.
Anbefaling: Utfør riktig sentrifugering av tomme rør i henhold til instruksjonene.
5. Annen urenhetsforurensning.
Analyse: Lagrede prøver eller spesialprøver er ikke forbehandlet.
Anbefaling: Forbehandle prøven grundig som anvist.
