Blod RNA isolasjonssett
Kitbeskrivelse:
Kat.nr.RE-04011/04013
For total RNA-rensing fra fullblod 104 ≤ Hvite blodceller ≤ 107
Isoler og rens blod-RNA raskt fra hvite blodceller.
-Du trenger ikke bekymre deg for RNA-nedbrytning.Hele settet er RNase-fritt
-Enkelt—alle operasjoner fullføres ved romtemperatur
-Rask—operasjonen kan fullføres på 20 minutter
-Høyt RNA-utbytte: Søyle med kun RNA og unik formel kan effektivt rense RNA
-Sikker - ingen organisk reagens brukes
-Stor prøvebehandlingskapasitet - opptil 200 μl prøver kan behandles hver gang.
-Høy kvalitet - det rensede RNA er svært rent, fritt for protein og andre urenheter, og kan møte forskjellige nedstrøms eksperimentelle applikasjoner.
Beskrivelser
Settet tar i bruk spinnkolonnen og formelen utviklet av selskapet vårt, som effektivt kan trekke ut total-RNA med høy renhet og høy kvalitet fra antikoagulert fullblod.Settet gir røde blodceller lysat (Buffer RCL), som raskt og effektivt kan lysere røde blodceller og beholde hvite blodceller.Den effektive DNA-rensekolonnen kan enkelt separere supernatanten og cellelysatene og adsorbere og fjerne genomisk DNA.Operasjonen er enkel og tidsbesparende;Den RNA-bare kolonnen kan effektivt binde RNA, og med en unik formel kan den behandle et stort antall prøver samtidig.
Hele systemet RNase-Free gjør det ekstraherte RNA ikke-nedbrytbart;Buffer RW1 og Buffer RW2 buffervaskesystem gjør det oppnådde RNA fritt for protein, DNA, ioner og organiske forbindelser.
Settets innhold
| Blood Total RNA Isolation Kit | ||
| Sett sammensetning | RE-04011 | RE-04013 |
| 50 ganger | 200 ganger | |
| Buffer RCL (10×) | 52,5 ml | 210 ml |
| Buffer BRL1* | 30 ml | 120 ml |
| Buffer BRL2 | 18 ml | 66 ml |
| Buffer RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffer RW2 | 24 ml | 96 ml |
| RNase-fri ddH2 O | 10 ml | 40 ml |
| RNA-bare kolonne | 50 sett | 200 sett |
| DNA-rensekolonne | 50 sett | 200 sett |
| Håndbok | 1 eksemplar | 1 eksemplar |
Egenskaper og fordeler
-Du trenger ikke bekymre deg for RNA-nedbrytning.Hele settet er RNase-fritt.
-Enkelt—alle operasjoner fullføres ved romtemperatur.
-Rask—operasjonen kan fullføres på 20 minutter.
-Høyt RNA-utbytte: RNA-bare kolonne og unik formel kan effektivt rense RNA.
-Sikker - ingen organisk reagens brukes.
-Stor prøvebehandlingskapasitet - opptil 200 μl prøver kan behandles hver gang.
-Høy kvalitet - det rensede RNA er svært rent, fritt for protein og andre urenheter, og kan møte forskjellige nedstrøms eksperimentelle applikasjoner.
Settparametere
Påføring av sett:
Den er egnet for ekstraksjon og rensing av totalt RNA fra pattedyrs fullblod.
Arbeidsflyt
Lagringsforhold
Buffer RCL (10×) bør lagres ved 2-8 ℃;andre komponenter i settet kan lagres ved romtemperatur (15-25 ℃) under tørre forhold, og kan lagres i 12 måneder.Buffer BRL1 kan lagres ved 4 ℃ i 1 måned etter tilsetning av β-merkaptoetanol (valgfritt).
Merk: Hvis den lagres ved lav temperatur, er løsningen utsatt for nedbør.Sørg for å plassere løsningen i settet ved romtemperatur i en periode før bruk.Forvarm den om nødvendig i et 37°C vannbad i 10 minutter for å løse opp bunnfallet, og bland godt før bruk.
Veiledninger for problemanalyse
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
Ingen RNA kan ekstraheres eller utbyttet av nukleinsyre er lavt
Det er vanligvis mange faktorer som påvirker utvinningseffektiviteten, for eksempel: prøve-RNA-innhold, operasjonsmetode, elueringsvolum, etc.。
Analyse av vanlige årsaker:
1. Isbad eller lavtemperatur (4 ° C) sentrifugering under drift.
Forslag: Romtemperatur (15-25 ° C) drift, aldri isbad og lavtemperatur sentrifuge.
2. Feil prøveoppbevaring eller prøveoppbevaring for lenge.
Forslag: Oppbevar prøver ved -80 ° C eller frys i flytende nitrogen, og unngå gjentatt bruk av fryse-tine;prøv å bruke ferske innsamlede prøver for RNA-ekstraksjon.
3.Utilstrekkelig prøvelysis
Anbefaling: Sørg for at prøven og arbeidsløsningen (lineært akrylamid) har blitt grundig blandet og inkubert i 10 minutter ved romtemperatur (15-25 ° C)
4. Eluenten ble tilsatt feil
Anbefaling: Sørg for at RNase-Free ddH2O tilsettes til midten av membranen til rensekolonnen
5. Feil volum av vannfri etanol i buffer viRW2
Forslag: Følg instruksjonene, tilsett riktig volum vannfri etanol til Buffer viRW2 og bland dem godt før du bruker settet.
6. Feil prøvebruk.
Forslag: 200 µl prøve per 500 µl buffer viRL.For stort prøvevolum vil resultere i redusert RNA-ekstraksjonshastighet.
7. Feil elueringsvolum eller ufullstendig eluering.
Forslag: Elueringsvolumet i rensekolonnen er 30-50μl;hvis elueringseffekten ikke er tilfredsstillende, anbefales det å tilsette forvarmet RNase-fri ddH2O og forleng tiden ved plassering ved romtemperatur, for eksempel 5-10 min
8.Rensingskolonnen har etanolrester etter skylling i Buffer viRW2.
Forslag: Hvis etanol fortsatt er igjen etter skylling i Buffer viRW2 og sentrifugering med tomme rør i 2 minutter, kan rensekolonnen stå i romtemperatur i 5 minutter etter sentrifugering med tomme rør for å fjerne gjenværende etanol fullstendig.
Nedbrytningen av rensede RNA-molekyler
Kvaliteten på det rensede RNA er relatert til faktorer som prøvelagring, RNase-kontaminering og drift.
Analyse av vanlige årsaker:
1.De innsamlede prøvene ble ikke lagret i tide.
Forslag: Hvis prøven ikke brukes i tide etter innsamling, vennligst oppbevar den ved -80 ℃ eller flytende nitrogen umiddelbart.For utvinning av RNA-molekyler, prøv å bruke ferske innsamlede prøver når det er mulig.
2. Innsamlede prøver ble fryst og tint gjentatte ganger.
Forslag: Unngå gjentatt frysing og tining (ikke mer enn én gang) under prøvetaking og lagring, ellers vil utbyttet av nukleinsyre reduseres.
3.RNase ble introdusert i operasjonssalen eller ingen engangshansker, masker osv. ble brukt.
Forslag: Eksperimentet med ekstraksjon av RNA-molekyler utføres best i et eget RNA-operasjonsrom, og forsøksbordet rengjøres før forsøket.Bruk engangshansker og -masker under eksperimentet for å unngå RNA-nedbrytning forårsaket av RNase-introduksjon.
4.Reagensen er kontaminert av RNase under bruk.
Forslag: Bytt ut med nytt viralt RNA-isolasjonssett for relaterte eksperimenter.
5. RNase-kontamineringen av sentrifugerørene, pipettespissene osv. Forslag: Sørg for at sentrifugerørene, pipettespissene og pipettene alle er RNase-frie.
De rensede RNA-molekylene påvirket nedstrøms eksperimenter
RNA-molekylene renset av rensekolonnen vil påvirke nedstrøms eksperimenter hvis det er for mye saltioner eller proteiner, for eksempel: omvendt transkripsjon, Northern Blot, etc..
1. Det er gjenværende salioner i de eluerte RNA-molekylene.
Anbefaling: Sørg for at riktig volum vannfri etanol er tilsatt Buffer viRW2, og vask rensekolonnen to ganger i henhold til riktig sentrifugeringshastighet i bruksanvisningen. Hvis det fortsatt er saltioner igjen, kan du tilsette Buffer viRW2 til rensekolonnen, og la den stå i romtemperatur i 5 minutter.Utfør deretter sentrifugering for å fjerne forurensning av saltioner i størst grad
2. Det er gjenværende etanol i de eluerte RNA-molekylene
Forslag: Når du har bekreftet at rensekolonnene har blitt skylt med Buffer viRW2, utfør sentrifugering med tomme rør i henhold til sentrifugalhastigheten i bruksanvisningen.Hvis det fortsatt er etanol igjen, kan det stå i 5 minutter i romtemperatur etter sentrifugering med tomme rør for å fjerne gjenværende etanol i størst grad.
Bruksanvisninger:
Bruksanvisning for viralt RNA-isolasjonssett
