(96-brønns) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR-sett – SYBR Green I
Beskrivelser
De(96-brønn) QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR-sett–SYBR Grønn Igiret unikt lyseringsbuffersystemto frigjør raskt RNAfra dyrket celleprøver for RT-qPCR-reaksjoner, noe som eliminerer det tidkrevende og arbeidskrevendeRNA-renseprosess, og tar bare 7 minutter å få den nødvendige RNA-malen.De5× Direct RT Mixog2× Direct qPCR Mix-SYBRleveres i esken kan raskt ogeffektivt få sanntids kvantitativePCR-resultater.
5× Direct RT Mix og 2× Direct qPCR Mix-SYBR har sterk inhibitortoleranse, og kan bruke lysatet til prøven som skal testes som en mal for effektiv revers transkripsjon og spesifikk amplifikasjon.Reagensen inneholder Foregene unik revers transkriptase med høy affinitet for RNA, samt Hot D-Taq DNA-polymerase, dNTPs, MgCl2 , reaksjonsbuffer, PCR-optimalisator og stabilisator, og kan brukes sammen med lyseringsbufferen for å oppdage prøven raskt, enkelt og nøyaktig, og den har egenskapene høy sensitivitet, sterk spesifisitet og god stabilitet.
Settet er rettet mot mikrosystemlyse av 96-brønners dyrkede celler, og har god ensartethet og konsistens;Kitkomponentene gir 96 lysereaksjoner, 96 revers transkripsjonsreaksjoner og 96×2 qPCR-reaksjoner, som kan møte 96-brønners celleplate for engangsbruk, og unngår forurensning forårsaket av gjentatt åpning, frysing og tining av reagenser og forringelse av reagensytelsen.
Komponenter i sett
| Sett sammensetning ( 50 μL lyseringssystem/20 μLRT reaksjonssystem /20μL qPCR reaksjonssystem) | DRT-03011 | Bemerke | |
| 96T | |||
| DelI | BufferCL | 5 ml | CelleLysis |
| ForegeneProtease Plus II | 100 μL | ||
| BufferST | 500 μL | ||
| Del II | DNAViskelær | 100 μL | |
| 5× Direct RT Mix | 400 μL | RT | |
| 2× direkte qPCR-blanding-SYBR | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50× ROX Reference Dye | 400µL | ||
| RNase- GratisddH2 O | 1,7 ml |
| |
| Mårlig | 1 stykke | 1 porsjon | |
*: Lysereagens DNA Eraser er inkludert i del II av settet;Cellelysis-, RT- og qPCR-komponenter kan kjøpes separat.
Egenskaper og fordeler
■Enkelt og effektivt: med Cell Direct RT-teknologi kan RNA-prøver fås på bare 7 minutter.
■ Prøvebehovet er lite, så lite som 10 celler kan testes.
■ Høy gjennomstrømning: den kan raskt oppdage RNA i celler dyrket i 384, 96, 24, 12, 6-brønns plater.
■ DNA Eraser kan raskt fjerne frigjorte genomer, redusere effekten på etterfølgende eksperimentelle resultater.
■ Optimalisert RT- og qPCR-system gjør to-trinns RT-PCR revers transkripsjon mer effektiv og PCR mer spesifikk og mer motstandsdyktig mot RT-qPCR-reaksjonshemmere.
Påføring av sett
Anvendelsesområde: dyrkede celler.
- RNA frigitt ved prøvelysis: gjelder kun for RT-qPCR-malen til dette settet.
- Settet kan brukes til følgende formål: genekspresjonsanalyse, verifisering av siRNA-mediert gendempende effekt, medikamentscreening, etc.
Lagring og holdbarhet
Del I av dette settet bør oppbevares ved 4℃;Del II bør lagres ved -20 ℃.
Foregene Protease Plus II bør oppbevares ved 4℃, ikke frys ved -20 ℃.
Reagens 2×Direct qPCR Mix-Taqman bør oppbevares ved -20℃i mørket;hvis den brukes ofte, kan den også lagres ved 4℃ for korttidslagring (bruk opp innen 10 dager).
Real Time PCR primer designprinsipper
Forward Primer og Reverse Primer
For sanntids PCR er primerdesign veldig viktig.Primere er relatert til spesifisiteten og effektiviteten til PCR-amplifikasjon, og kan utformes med referanse til følgende prinsipper:
- Primerlengde: 18-30bp.
- GC-innhold: 40-60%.
- Tm-verdi: Primer-designprogramvare, som Primer 5, kan gi Tm-verdien til primeren.Tm-verdiene til oppstrøms og nedstrøms primere bør være så nærme som mulig.Tm-beregningsformelen kan også brukes: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Når du utfører PCR, velges vanligvis en temperatur under primerens Tm-verdi på 5 °C som annealingstemperatur (den tilsvarende økningen i annealingstemperaturen kan øke spesifisiteten til PCR-reaksjonen).
- Primere og PCR-produkter:
- Design primer PCR amplifikasjonsproduktlengde er fortrinnsvis 100-150 bp.
- Designprimere i det sekundære strukturelle området av malen bør unngås så mye som mulig.
- Unngå dannelsen av 2 eller flere komplementære baser mellom 3′-endene av oppstrøms- og nedstrømsprimere.
- Primer 3′ terminalbase kan ikke være til stede med 3 ekstra påfølgende G eller C.
- Primerne i seg selv kan ikke ha komplementære strukturer, ellers vil det dannes en hårnålsstruktur som påvirker PCR-amplifisering.
- ATCG bør fordeles så jevnt som mulig i primersekvensen, og den 3′ terminale basen bør unngås som T.
blindtarm1: Celler direkteRT-qPCR Kit komponentt tilleggspakke
1. Cellelyseløsning
| Cellelyseløsning | |||
| Komponenter i sett (24-brønners lyseringssystem / brønn) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| DelJeg | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| DelII | DNA viskelær | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| Komponenter i sett (20 μl reaksjonssystem) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| RNase-fri ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR-blanding | ||
| Komponenter i sett (20 μl reaksjonssystem) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× ROX Reference Dye | 40 μl | 200 μl |
| RNase-fri ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Bruksanvisninger:
