Tips for å forbedre limgjenvinningen

1. Øk prøvebelastningen under elektroforese.

2. Bruk nylaget elektroforesebuffer.

3. Når du skjærer lim, prøv å kutte bare limet med strimler for å redusere volumet av limskjæring: trenger ikke lim med få formålsfragmenter, ellers vil det påvirke gjenvinningsgraden.

4. Etter å ha smeltet to eller flere limbiter, bruk et rør uansett hvor stort volumet er og overfør det til samme kolonne.

5. Løsningen tilsatt i solen kan være litt mer, noe som er mer gunstig for bindingen av DNA til membranen, men overstiger vanligvis ikke 750 ul.

6. Nøkkelen til gelgjenvinning er å binde DNA til kolonnen gjennom saltkonsentrasjonen, surheten (ladningen) og hydrofobiteten til løsningen i kolonnen.Derfor, hvis pH i elektroforesebufferen er for høy, kan 10 ul (pH 5,0, 3mol/L NaAC) tilsettes til solen;for bedre å fange opp DNA-molekyler på membranen, kan 30% isopropanol tilsettes for å varme inn i væsken etter oppløsning av limet.

7. Før du tilsetter eluenten, la kolonnen stå i romtemperatur i noen minutter (ca. 10 minutter) for å fordampe etanolen fullstendig.

8. Til slutt tilsett mindre elueringsmiddel for å minimere gjenvinningsvolumet.Generelt brukes 30-50μl elueringsmiddel til eluering (ikke for lite, ellers vil det ikke være i stand til å fukte membranen, noe som ikke bidrar til eluering);elueringsdråpene er i midten av membranen, for å fullstendig eluere DNA bundet til membranen.

9. Etter tilsetning av eluenten kan den elueres i vannbad på 55 grader i 5 minutter eller legges i vannbad på 50 grader i mer enn 10 minutter, eller forsegles med en parafilm ved 4 grader over natten, og deretter sentrifugeres for utvinning neste dag, effekten er god.

10. Tilsett det sentrifugerte eluatet tilbake til adsorpsjonskolonnen og sentrifuger igjen.

Detaljerte metoder og prosedyrer for PCR-produktgjenoppretting

1. Vanlig gummigjenvinning

Hvis du vil gjenopprette limet, er det best å bruke et sett, som er praktisk og har en litt høyere gjenvinningsgrad.Hvis du virkelig trenger å gjenopprette den manuelt, kan du legge til 3 ganger volumet av TE etter å ha kuttet limet.Etter smelting i vannbad ekstraheres fenol, fenol/kloroform rent, og etanol utfelles.Det er det.

2. DNA-gjenvinning fra geler med lavt smeltepunkt

Rensing av DNA-fragmenter Tilsett TE (10 mmol/l Tris-HCl pH 8,0, 0,1 mmol/l EDTA) lik volumet av gelen, og plasser i et 65°C vannbad i 5 minutter for å oppløse gelen fullstendig.

Etter at den var brakt til romtemperatur ble en lik mengde fenol (mettet med TE, TE forseglet i det øvre laget, og det nedre laget av fenol ble fjernet) tilsatt, og blandingen ble forsiktig blandet (ingen blanding nødvendig), og sentrifugert ved 12 000 rpm i 3 minutter.Gjenta 1-2 ganger.

Ta supernatanten, tilsett 0,1 volum 3mol/L natriumacetat (pH 5,2) og 2,5 ganger volum absolutt etanol for å utføre etanolutfelling.Løs opp det rensede DNA med en passende mengde TE, mål innholdet og klargjør for bruk (det kan brukes til målgenstrukturanalyse, probepreparering osv.).

3. PCR-gjenoppretting med god amplifikasjonsspesifisitet

Hvis spesifisiteten til PCR-amplifikasjon er god, er det bare en enkel rensing og gjenvinning av PCR-produktet.Du kan tilsette 50 ug/ml proteinase K til PCR-produktet, 37 grader i 1 time, ekstrahere én gang med fenol/kloroform, ekstrahere én gang med kloroform og tilsette 0,1 volum av supernatanten.Natriumacetatet ble gjenvunnet ved utfelling med 2,5 volumdeler absolutt etanol.

Relaterte produkter:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/