PCR-metoder og nukleinsyreaerosolkontaminering i nukleinsyretestlaboratorier er som to sider av en sak.Vi kan bare velge å ha det eller ikke, men vi kan ikke velge om vi vil ha det eller bruke det.

1. Screening av DNA-fjerner

For å oppnå romlig fjerning av nukleinsyreaerosolforurensning, er det først nødvendig å sile ut DNA-fjernere som kan fjerne nukleinsyrer i flytende tilstand.For det er ikke mange DNA-fjernere som virkelig fungerer.For den eksperimentelle metoden, se: DNA-fjerner kan ikke være et "hemmelig hjørne" av laboratoriet!

I dette eksperimentet ble 100 kopier/μL (CT ca. 31) av ASFV-plasmid og DNA-fjerner kvantifisert ved digital PCR blandet i like store volumer, og deretter reagert ved romtemperatur i henholdsvis 10 minutter, 20 minutter og 30 minutter.Etter nukleinsyreekstraksjon ble qPCR-amplifisering utført.En positiv kontroll blandet med plasmid og vann ble sammenlignet.Siden forsøket ikke ble avsluttet samtidig kan det være et visst avvik mellom resultatene, men det påvirker ikke konklusjonen av forsøket.Så langt har jeg vurdert 10 kommersielle DNA-fjernerprodukter.Kun nr. 1, nr. 6 og nr. 8 produkter kan effektivt bryte ned plasmid-DNA i flytende tilstand.Andre produkter har nesten ingen effekt.

Tabell 1 Nukleinsyrefjerningseffekt av kommersielt tilgjengelig DNA-fjerner

2. DNA-fjerningseffekteksperimentet av vanlige desinfeksjonsmidler

1. Screening av vanlig brukte desinfeksjonsmidler

Det er mange typer desinfeksjonsmidler som vanligvis brukes i laboratorier: aldehyder, fenoler, alkoholer, kvaternære ammoniumsalter, peroksider, klorpreparater og syrer og baser.Desinfeksjonseffektene av disse desinfeksjonsmidlene på mikroorganismer er fullstendig verifisert ved eksperimenter, men det er ikke tilstrekkelige eksperimentelle data om nedbrytningseffekten av nukleinsyrer.Nukleinsyretestlaboratorier trenger et desinfeksjonsmiddel som ikke bare har en god desinfiseringseffekt på mikroorganismer, men som også kan bryte ned DNA.Testresultatene viser at kun to klorpreparater av 84 desinfeksjonsmiddel og triklorisocyanursyre og 1 M saltsyre oppfyller kravene.Siden 1 M saltsyre er svært etsende, anbefales det at klorpreparater brukes som avfallshåndtering i nukleinsyretestlaboratorier.Klorpreparater er imidlertid etsende for metaller og kan ikke brukes til desinfeksjon av instrumenter og utstyr.

Tabell 2 DNA-fjerningseffekter av ulike typer desinfeksjonsmidler

2. Minimum effektive konsentrasjon av klorpreparater

Klorbaserte desinfeksjonsmidler har en sterk DNA-nedbrytningseffekt, men på grunn av metallets korrosivitet og irritasjon kan de brukes til å rengjøre gulvet, ikke-metalliske benkeplater, bløtleggingsspisser, sentrifugerør og andre testartikler.

I henhold til "New Coronary Pneumonia Epidemic Disinfection Technical Guidelines": Forurensninger (pasienters blod, sekret og oppkast) tilgjengelig klor 5g/L-10g/L klorholdig desinfeksjonsmiddel;gulv, vegger og gjenstandsoverflater bruker tilgjengelig klor 1g/L Klordesinfeksjonsmiddel: klær, sengetøy og andre tekstiler dynkes først i klordesinfeksjonsmiddel med 0,5g/L tilgjengelig klor i 30 minutter, og rengjøres deretter som vanlig.

Tabell 3 DNA-fjerningseffekt av ulike konsentrasjoner av klordesinfeksjonsmiddel

Testresultatene viser at: når den effektive klorkonsentrasjonen er større enn eller lik 1,2 g/L, kan det klorholdige desinfeksjonsmiddelet fullstendig bryte ned 100 kopier/μL plasmid når det brukes i 5 minutter.Ved virke i 10 minutter kan 84-desinfeksjonsmiddel med en effektiv klorkonsentrasjon større enn eller lik 0,6 g/L bryte ned 100 kopier/μL plasmider fullstendig.

3. Luftfjerningseksperiment forurenset av nukleinsyreaerosol

Hvordan rense luften som er forurenset av nukleinsyreaerosoler?De fleste tankene går ut på å skape et aerosolforurenset miljø og deretter rydde opp i det, eller å rydde opp i nukleinsyrer etter kontaminering.For meg er et eksperiment som ikke kan gjentas og resultatene av eksperimentet ikke kan analyseres kvantitativt meningsløst, så jeg lånte noen metoder for desinfiserende luftdesinfeksjon.Se "GB27948-2020 Generelle krav for luftdesinfeksjonsmidler" og "Tekniske spesifikasjoner for desinfeksjon"

1. Testmateriale

1.1 DNA-fjerner: I dette eksperimentet ble to kommersielt tilgjengelige DNA-fjernere 6 og 8 i tabell 1 valgt.

1.2 Testplasmid: Tatt i betraktning at CT-verdien for de fleste laboratorieforurensninger vil være høyere enn 30, er konsentrasjonen av ASFV-genplasmid som brukes denne gangen ca. 100 kopier/μL, og den fluorescerende kvantitative PCR-CT er ca. 31,07.Tilsett plasmidet til den flokkede bomullspinnen og lufttørk.

1.3 Testinstrument: Bilingkehan KVBOX desinfeksjonsinstrumentet, som er vennlig støttet av Shenzhen Runlian Environmental Technology Co., Ltd., har utmerket luftdesinfeksjonsytelse med hydrogenperoksiddesinfeksjonsmiddel, og kan effektivt drepe sporer og andre mikroorganismer.

1.4 Testrom: et lukket overføringsvindu på ca 0,1 kubikkmeter.

2. Testmetode

Mengden desinfeksjonsmiddel satt på desinfeksjonsmaskinen er 10 ml, og konsentrasjonen er 100 ml/m3, som er mye høyere enn "GB27948-2020 Generelle krav for luftdesinfeksjonsmidler": når du bruker aerosolspraydesinfeksjon, bør mengden desinfeksjonsmiddel være ≤10 ml/m3