Laboratorietesting begynner med prøvetaking, og prøveinnsamling er den enkleste å overse.Det viktigste for prøvetaking er å velge riktig prøvetype, bruke passende prøvetakingsverktøy og gjennomføre rimelig transport og behandling.

I.Sample type

Vanlige prøvetyper er som følger:

Prøvetakingsmetoden kan referere til de tekniske spesifikasjonene for miljøovervåking av det nye koronaviruset i landbrukshandelen (basaren)":

1. Vaskeprøver fra svelgprøver, hender, klær og andre gjenstander til utøvere: det er påkrevd å bruke viruskonserveringsløsningen i virusprøverøret og infiltrere bomullspinnene fullstendig.Overflaten av bakken) påføres gjentatte ganger og skylles mer enn 3 ganger.Samtidig er det nødvendig å utføre flerpunkts distribuert prøvetaking på overflaten av prøveobjektet.

2. Matoverflateprøver: Matprøver kan ikke tas direkte.Maten som skal samles bør skilles forsiktig og oppbevares i en ren prøvetakingspose før vattpinneprøver tas.Det er nødvendig å bruke viruskonserveringsløsningen i virusprøverøret, etter å ha bløtlagt bomullspinnen for prøvetaking, for å gjentatte ganger smøre ut og skylle overflaten av matprøven som skal tas, mer enn 3 ganger.Samtidig er det nødvendig å utføre flerpunkts distribuert prøvetaking på prøveoverflaten.

3. Avløpsprøver: I henhold til fordelingen av avløpssystemet i markedet velges 2-3 prøvetakingssteder for avløp, med fokus på intern ledningsnettoppsamling, nedstrøms vannføringsretningen, eller koblingen til kommunalt ledningsnett.For å samle en vattpinneprøve, dypp den ned i kloakken med en bomullspinne for å få den til å adsorbere kloakken og skyll den i prøvetakingsrøret mer enn 3 ganger.For å samle kloakkprøver, bruk polyetylenplastflasker til å samle 30-500 ml kloakkvannprøver;for oppsamling av kloakk med et volum større enn 500 ml, kan polyetylenplastbøtter eller spesialanrikningsutstyr på stedet brukes.Samtidig er det nødvendig å gjennomføre flerpunkts distribuert prøvetaking for kloakkprøvetakingsstedet.

4. Dyreprøver: For levende dyr kan prøvetakingsprøver brukes til å samle kroppsoverflateprøver, orofaryngeale vattpinner og analprøver, og ekskrementer eller sekresjonsprøver kan også samles inn og registreres tilsvarende på journalen.For dyreprøver som har blitt flådd osv., bruk bomullspinner for å samle prøvene fra kroppsoverflaten og kroppshulen.Det er nødvendig å bruke viruskonserveringsløsningen i virusprøverøret for å infiltrere prøvetakingsbomullspinnen fullstendig, og deretter gjenta påføringen av overflaten av matprøven som skal tas.Shabu mer enn 3 ganger.Samtidig er det nødvendig å utføre flerpunkts distribuert prøvetaking på prøveoverflaten.

5. Andre apparater: beholdere for transport og avl av dyr som bur eller fisketanker.Først observer eller forstå de spesifikke dyretypene som er lagret og avlet i beholderen, og samle vattpinneprøver på den indre veggen av beholderen eller flytende prøver av innholdet.

6. Samle aerosolprøver i områder der folk samles, dårlig ventilerte lokale handelsområder, kontorer og hvilerom.

II.Samplingverktøy
1. Blodprøverør
Hvis du trenger å gjøre nukleinsyretesting og antikoagulantprøver senere, anbefales det å bruke et vakuumblodkar som inneholder EDTA-antikoagulant for å samle blod;for serumprøver anbefales det å bruke et vakuumblodkar uten antikoagulant.

2. Prøvetaking av vattpinne

Det anbefales å bruke polypropylen vattpinner i stedet for kalsiumalginat vattpinner eller vattpinner med trestenger, fordi de kan inneholde stoffer som inaktiverer visse virus og hemmer PCR-testing.Vatter med bomullshoder kan ikke brukes, fordi bomullsfibre har en sterk adsorpsjon av protein og elueres ikke lett inn i den påfølgende konserveringsløsningen.

I "Tekniske spesifikasjoner for 10-i-1 blandet innsamling og påvisning av nye koronavirusnukleinsyrer", er det klart fastsatt at "prøvetakingspinnen skal være laget av polyester, nylon og andre ikke-bomull og ikke-kalsiumalginatmaterialer, og håndtaket skal være laget av ikke-tremateriale.Bruddpunktet er omtrent 3 cm fra toppen av vattpinnehodet, som er lett å bryte.»

CDC i USA nevnte også "Bruk bare syntetiske fiber vattpinner med plast- eller trådskaft.Ikke bruk kalsiumalginatpinner eller vattpinner med treskaft,da de kan inneholde stoffer som inaktiverer enkelte virus og hemmer PCR-testing.

For tiden mye brukt er en engangs steril nylon flocking vattpinne kombinert med en plaststang.Den flokkede vattpinnen har bedre vannabsorpsjon og frigjøringshastighet.I henhold til forskjellige prøvetakingssteder har vattpinnehodet også forskjellige størrelser og fibre.Tykkelsen.”

3. Prøve transportkonserveringsløsning

Virusinaktiveringskonserveringsløsning: en passende mengde guanidinsaltkonsentrasjon og en rekke viruslyseringskomponenter kan lysere viruset direkte for å frigjøre nukleinsyre, inaktivere RNase og DNase, og sikre integriteten til nukleinsyre, som kan brukes til påfølgende qPCR-deteksjon.Den kan ikke brukes til virusdyrking og isolering.

Virustransport- og konserveringsløsning: inneholder salter, aminosyrer, vitaminer, glukose og protein som er nødvendig for virusets overlevelse, som kan opprettholde virusets aktivitet.Det kan brukes til nukleinsyreekstraksjon og påvisning av viruset i fremtiden, og det kan også brukes til dyrking og separasjon av viruset.

4. Prøvekonserveringsrør og prøvepose

Prøvelagringsrøret skal være et sterilt plastrør med skrukork som ikke adsorberer nukleinsyre.Hvert prøverør bør dekkes med en prøvepose for å forhindre lekkasje og kontaminering av prøven.

III.Interfererende stoffer i prøven

Interfererende stoffer i PCR-eksperimenter

1. endogen interferens

Stoffer som finnes i kroppsprøven kan forstyrre påvisningen av andre stoffer.

Blod:hem (>1mg/ml), hemin (>0,1ng/μl), triglyserider, IgG, etc.;

Urin:Urea (20 mM);

Krakk:plante polysakkarider, cholate;

Vev:protease, kollagen;

Melk: protease, kalsiumion;

Narkotika: antibiotika, antivirale legemidler, hormoner, etc.

annen.

2. eksogen interfererende

Det kommer fra stoffer som kan forstyrre påvisningen av andre stoffer in vitro.Prøvetilsetningsstoffer og stoffer som kan kontaktes under prøvetaking og behandling:

Test forsyninger: serumseparasjonsgel, prøvetakingsbeholder og gummipropp, kateter, kateterskyllevæske, hanskepulver, etc.

Antikoagulant: heparin (>0,1 U/ml), EDTA (>0,5 mM), etc.;

Organiske løsemidler: isopropanol (>0,1 IE/ml), betain, dimetylsulfoksid, formamid, glyserin, PEG, etc.;

Desinfeksjonsmidler: alkoholer (etanol>1%), aldehyder, fenoler (fenol>0,2%), peroksider, sterke syrer (HCl), sterke alkalier (NaOH), etc.;

Vaskemiddel:SDS (>0,005%);

Jord: Humus

Fargestoff: Indigo

annen.

Under faktiske utendørs prøvetakingsforhold, som for eksempel innsamling av miljøprøver, kan prøvene inneholde en rekke forstyrrende stoffer, og sammensetningen av forstyrrende stoffer på hvert sted er forskjellig, noe som krever at PCR-interferenseksperimenter utføres i henhold til lokale forhold.

IV.Prøve lagrings- og transportforhold

Ferske innsamlede kliniske prøver skal sendes til laboratoriet innen 2 til 4 timer etter innsamling ved 2°C til 8°C.Oppbevares ved 4 ℃ innen 24 timer.Prøver som brukes til virusisolering og nukleinsyredeteksjon bør testes så snart som mulig.Prøver som kan testes innen 24 timer kan oppbevares ved 4°C;Prøver som ikke kan oppdages innen 24 timer, bør oppbevares ved -70°C eller lavere (hvis ikke- Oppbevares ved 70°C i kjøleskap ved -20°C).

Sammendrag:Standardisert innsamling, transport og lagring av prøver er avgjørende for etterfølgende testing.De falske negativene fra mange laboratorietester er forårsaket av feil innsamling, transport og lagring av prøver som fører til nedbrytning av viral nukleinsyre.Imidlertid ignorerer mange laboratorier viktigheten av prøvetaking.Jeg håper denne artikkelen kan vekke alles oppmerksomhet til prøvetaking og gjøre mer vitenskapelig og fornuftig prøvetaking!

Relatert produkt:

SARS-CoV-2 Variant Nucleic Acid Detection Kit (I) (Multiplex PCR Fluorescent Probe Method) - For påvisning av mutanter fra Brasil, Sør-Afrika og Storbritannia