Hvor mye vet du

Om Nukleinsyreekstraksjon

Begynnelsen og slutten av renset nukleinsyre

Alt er vanskelig i begynnelsen, renset nukleinsyre er mest

Igangsetting av molekylære eksperimenter, for påfølgende eksperimenter

Suksess eller fiasko har en avgjørende innvirkning.

Spor-/ultraspor-UV-spektrofotometer er foretrukket av mange vitenskapelige forskere fordi det enkelt, raskt og økonomisk kan oppdage nukleinsyrekonsentrasjon og protein- og saltionrester.

Som vi alle vet betyr A260 nukleinsyreabsorbans OD-verdi, A280 betyr proteinkonsentrasjon absorbans OD-verdi, A230 betyr saltionkonsentrasjon absorbans OD-verdi, så A260 kan konvertere nukleinsyrekonsentrasjon, A260/280 betyr proteinrest, A260/230 betyr saltionrest, men dette er bare en regel som er oppdaget av forskerne, basert på en regel.konvensjonell” å tro at det kan forklare renheten til DNA og RNA tilen viss grad.Det er ikke den eneste standarden for identifisering av nukleinsyreutbytte og renhet, den brukes bare som en referanse, og den er ikke en "gullstandard".

Thermo Fisher ND-2000-manualen understreker påliteligheten til testresultatene

Årsaken er at resultatene som er oppnådd ved bruk av et mikro/ultramikro UV-spektrofotometer kun reflekterer utbyttet og renheten til nukleinsyre fra siden, og det er mange påvirkningsfaktorer (optisk vei, prøvevolum, prøvekonsentrasjon, pH-verdi, andre ioner som påvirker absorbansmåling, etc.), den målte OD-verdien er ikke nødvendigvis nøyaktig.På samme tid, på grunn av mangelen på spesifisitet til absorbansverdibestemmelsesmaterialet, har enkelttrådet DNA, dobbelttrådet DNA, RNA, dNTP-er og noen proteiner alle absorpsjonstopper ved 260 nm bølgelengde, og konsentrasjonen bestemt av A260 alene er ikke nødvendigvis det virkelige DNA eller RNA.Konsentrasjon, og dens integritet og forringelse kan ikke bedømmes.

Så hvordan bedømme kvaliteten på vår rensede nukleinsyre?I tillegg til å bruke et mikro/ultramikro UV-spektrofotometer for deteksjon, kreves det også metoder som agarosegelelektroforese for å visuelt vise renheten og integriteten til nukleinsyren, og for å indikere konsentrasjonen til en viss grad.På denne måten er nukleinsyreutbyttet og renheten oppnådd fra deteksjonsresultatene til forskjellige metoder troverdig.

Eksperimentell diagramsammenligning

Genomisk DNA fra H1299-celler ble ekstrahert ved å bruke selskap A sine DNA-ekstraksjonssett, og det ble sett betydelig urenhetsforurensning, noe som resulterte i høye OD-verdier

(OD-måleverdi og tilsvarende elektroferogram)

Evalueringsindeks

Finnes det en "gullstandard" for nukleinsyreutbytte og kvalitetstesting?

Så vidt vi vet finnes det ingen enkel, rask og billig metode.Enten det er spektrofotometer, gelelektroforese eller massespektrometri, reflekterer de alle konsentrasjonen og renheten til nukleinsyren i løsningen fra forskjellige aspekter, og de må bedømmes ved å referere til hverandre.

Den beste evalueringsindeksen er alltidden oppfølgende eksperimentelle søknaden.Det påvirker ikke effektiviteten av revers transkripsjon og PCR-amplifikasjon.Å oppnå pålitelige amplifikasjonsprodukter og Ct-verdier og oppnå en fullstendig sekvens ved sekvensering er vellykket nukleinsyreekstraksjon.

For å oppsummere bør synet på teorien om kun forholdsmessige forhold utfordres av synet om å «bruke gode nedstrøms eksperimentelle resultater som gode ekstraksjonsparametere»!

Anbefalte Foregene DNA RNA-ekstraksjonssett for å få høy DNA/RNA-renhet:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/