Etabler PCR-eksperiment-SOP for å standardisere oppførselen til eksperimentpersonell.
Eksperimentatoren følger strengt driftsprosedyrene, og minimerer PCR-forurensning som kan være forårsaket av menneskelige faktorer eller forhindrer forekomst av forurensning.I tillegg bør eksperimentatoren ha tilsvarende faglig kunnskap og ferdigheter, inkludert ferdigheter i å betjene relatert utstyr, klargjøre hele arbeidsprosessen, beherske behandlingsmetodene for kontaminering og laboratoriekvalitetskontrollmetoder, og være i stand til å tolke testresultatene korrekt.
Etablere et standard PCR-laboratorium.
PCR-laboratoriet er i prinsippet delt inn i fire områder, nemlig reagensforberedelsesområde, prøvebehandlingsområde, amplifikasjonsområde og amplifikasjonsproduktanalyseområde.De to første områdene er pre-amplifikasjonsområder, og de to siste områdene er post-amplifikasjonsområder.Pre-amplifikasjonssonen og post-amplifikasjonssonen bør være strengt atskilt.Eksperimentelle materialer, reagenser, registreringspapir, penner, rengjøringsmidler osv. kan bare strømme fra pre-amplifikasjonsområdet til post-amplifikasjonsområdet, det vil si fra reagensprepareringsområde → prøvebehandlingsområde → amplifikasjonsområde → amplifikasjonsproduktanalyseområde, og må ikke flyte bakover.Luftstrømmen i laboratoriet bør også strømme fra pre-amplifikasjonsområdet til post-amplifikasjonsområdet, og ikke strømme bakover.Det ideelle PCR-laboratoriedesignet er vist nedenfor:
Figur A: Ideell PCR-laboratorieoppsettmodus med undertrykk i bufferrommet
Figur B: Ideell PCR-laboratorieoppsettmodus med positivt trykk i bufferrommet
PCR-laboratorieoppsettdiagrammene gitt i figur A og figur B bør være en mer ideell oppsettmodus, og laboratoriet med betingelser kan referere til denne modusen for design.For vanlige laboratorier anbefales det at PCR-amplifikasjonsområdet og produktanalyseområdet kan skilles, og åpningen av dekselet bør reduseres så mye som mulig i prøveforberedelsesområdet og PCR-amplifikasjonsområdet.Husk: Produkter og eksperimentelle forsyninger i produktanalyseområdet er strengt forbudt å bli tatt med til prøveforberedelsesområdet og PCR-amplifikasjonsområdet.
Dersom laboratoriet kun utfører PCR-deteksjon og identifikasjon, anbefales det å bruke fluorescerende kvantitativ PCR i stedet for konvensjonell PCR.
Fluorescens kvantitative PCR-deteksjonsresultater kan samles inn og analyseres av fluorescenssignaler, så det er ikke nødvendig å åpne lokket for elektroforese etter reaksjonen, noe som unngår PCR-produktforurensning forårsaket av lekkasje av reaksjonsprodukter for å danne aerosoler.Hvis du øker antall hetteåpninger under påfyllingstrinnet for gelelektroforese, vil det sannsynligvis oppstå aerosolforurensning.Det anbefales å fremme bruken av kvantitativ PCR og gradvis erstatte kvalitativ PCR.
UNG anti-PCR-produktkontamineringssystem brukes til PCR-reaksjonen.
Systemet bruker dUTP i stedet for dTTP.Etter PCR-reaksjonen blir alle PCR-produkter (DNA-fragmenter) inkorporert med dUTP;i neste runde med PCR-reaksjon inkuberes UNG-enzymet tilsatt til systemet ved 37°C i 5 minutter før PCR, som spesifikt kan bryte ned alle DNA-fragmenter som inneholder dUTP, og deretter utføre PCR-reaksjon.Dette kan fullstendig fjerne aerosolforurensning forårsaket av PCR-produkter.Effekten er vist i figuren nedenfor:
Merk: For direkte PCR-serien kan du velge serieproduktene til anti-PCR-produktkontamineringssystemet til ForegeneForeslå
For laboratorier som utfører storskala genotypetesting, anbefales det sterkt å bruke UNG anti-PCR-produktkontamineringssystem for testing av reagenser i tillegg til bygging av rimelige laboratorier.
Påminnelse: Bruken av dette systemet kan ikke fjerne PCR-produktforurensning som allerede er forårsaket.Derfor bør UNG-systemet brukes i begynnelsen av den relevante testen, og UNG-systemet bør brukes til PCR-amplifikasjon, for å forhindre kontaminering av PCR-produkter Falsk positiv.
Det anbefales å bruke Direct PCR-UNG-systemet til Foregene når du utfører storskala testing, for eksempel:
Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG；
Plant Seed Direct PCR Kit-UNG；
Animal Tissue Direct PCR Kit-UNG；
Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.
Denne serien med sett fra Foregenekan ikke bare utføre PCR-deteksjon raskt og i stor skala, men også effektivt forhindre og kontrollere PCR-produktforurensning.
Innleggstid: 19. mars 2021
