Følgende analyse av mulige problemer iBuccalvattpinne/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

Rensekolonnen er tilstoppet

I dette settet, i den genomiske DNA-ekstraksjonsoperasjonen, adsorberes rensekolonnen direkte på prøvens enzymatiske lyseringsblanding uten sentrifugeringstrinn, og rensekolonnen kan blokkeres på grunn av ufullstendig enzymisering og høy viskositet av prøven.

Følgende mulige årsaker er som følger:

1. Ufullstendig enzymatisk fordøyelse av vevsprøver.

Anbefaling: Prøvebehandlingstiden for Foregene Protease kan forlenges på passende måte, eller supernatanten kan tas etter sentrifugering ved 12 000 rpm (~13 400× g) i 5 min.

2. Overdreven bruk av vevsprøver eller store vev.

Anbefaling: Det er best å ikke overstige 1Buccal vattpinne i prøven;hvis prøven er for stor, øk dosen av Buffer ST1, Foregene Protease, buffer ST2 tilsvarende.

3. Prøvens viskositet er for høy.

Anbefaling: Prøver kan fortynnes passende med 10 mM Tris-HCl før genomisk DNA-ekstraksjon.

4. Fragmenter av blodkortet har blitt sugd.

Anbefaling: Den forbigående sentrifugeringstiden i trinn 6 av blodflekk (FTA-kort) genomisk ekstraksjon kan forlenges på passende måte.

Lavt utbytte eller ingen DNA

Det er ofte en rekke faktorer som påvirker genomisk DNA-utbytte, inkludert prøveopprinnelse, prøvelagringsforhold, prøvepreparering, manipulering, etc.

Genomisk DNA kan ikke oppnås under ekstraksjon

De mulige årsakene er som følger:

1. Feil bevaring av prøver eller lagring for lenge fører til genomisk DNA-nedbrytning.

Anbefaling: Orale vattpinner bør fortrinnsvis være nyprøvede, og det er ikke tilrådelig å bruke konserverte vattpinner for genomiske DNA-ekstraksjonsoperasjoner;blodflekkprøver skal sikre at kvaliteten er kvalifisert og lagringstiden bør ikke være for lang.

2. For lite bruk av vev kan føre til ingen ekstraksjon av det tilsvarende genomiske DNA.

Anbefaling: Følgbuccal instruksjoner for prøvetaking av vattpinne i operasjonsveiledningen, og tørk av så mange ganger som mulig slik at nok celler kan festes til den orale vattpinne for genomisk DNA-ekstraksjon;for ekstraksjon av blodflekker kan området for blodflekksskjæring økes på passende måte.

3. Foregene Protease er feil bevart, noe som resulterer i en reduksjon i aktiviteten eller inaktivering.

Anbefaling: Bekreft lagringsforholdene forForegene Protease eller erstatte den med en ny Foregene Protease for enzymatisk reaksjon.

4. Feil oppbevaring av settet eller lagringstiden er for lang, noe som resulterer i feil på enkelte komponenter i settet.

Anbefaling: Kjøp en nyBuccal vattpinne DNAisolering sett for relaterte prosedyrer.

5. Buffer WB tilsetter ikke absolutt etanol.

Anbefaling: Bekreft at buffer WB tilsetter riktig volum av absolutt etanol.

6. Eluenten er ikke riktig tilsatt silikonfilmen.

Anbefaling: Legg til 65°Cforvarmet elueringsmiddel faller til midten av silikonmembranen og la stå i romtemperatur i 5 minutter for å øke elueringseffektiviteten.

Low-yield genomisk DNA isolert

Følgende mulige årsaker er som følger:

1. Feil bevaring av prøver eller lagring for lenge fører til genomisk DNA-nedbrytning.

Anbefaling: Orale vattpinner er fortrinnsvis ferske, og konserverte vattpinner bør ikke brukes til genomisk DNA-ekstraksjon.

2. Hvis mengden vevsprøve er for liten, vil det ekstraherte genomiske DNA-innholdet være mindre.

Anbefaling: Følg instruksjonene for prøvetaking av oral vattpinne i bruksveiledningen, og tørk av så mange ganger som mulig slik at nok celler kan festes til den orale vattpinne for genomisk DNA-ekstraksjon.

3. Foregene Protease er feil bevart, noe som resulterer i en reduksjon i aktiviteten eller inaktivering.

Anbefaling: Bekreft lagringsforholdene forthe Foregene Protease eller erstatte den med en ny Foregene protease for enzymatisk reaksjon.

4. Elueringsproblemer.

Anbefaling: Bruk buffer EB for eluering;hvis du bruker ddH₂O eller andre elueringsmidler, bekreft at pH i eluatet er mellom 7,0-8,5.

5. Eluatet er ikke riktig tilsatt dråpevis.

Anbefaling: Tilsett elueringsdråper til midten av silikonmembranen og la stå i romtemperatur i 5 minutter for å øke elueringseffektiviteten.

6. Elueringsvæsken samler seg for lite.

Anbefaling: Bruk elueringsmiddel for genomisk DNA-eluering som påkrevd i instruksjonene, minstikke mindre enn 15μl.

Låh renhet of genomisk DNAisolert

Lav genomisk DNA-renhet kan føre til feil eller utilfredsstillende resultater av nedstrøms eksperimenter, slik som: enzymer kan ikke kuttes opp, PCR kan ikke få genfragmentet av interesse, etc.

De mulige årsakene er som følger:

1. Heteroproteinforurensning, RNA-forurensning.

Analyse: Rensekolonnen ble ikke vasket med buffer PW;Buffer PW vaskerensekolonnen ble ikke vasket med riktig sentrifugalhastighet.

Anbefaling: Sørg for at det ikke er noen utfelling i supernatanten før du tilsetter etanol;sørg for å vaske rensekolonnen i henhold til instruksjonene, og dette trinnet kan ikke utelates.

2. Urenhet ionforurensning.

Analyse: Buffer WB vaskerensekolonne ble utelatt eller vasket bare én gang, noe som resulterte i gjenværende ionisk forurensning.

Anbefaling: Sørg for å vaske Buffer WB 2 ganger som anvist for å fjerne gjenværende ioner så mye som mulig.

3. RNA-enzymkontaminering.

Analyse: Fremmede RNaser ble tilsatt til buffer;Buffer PW-vaskeoperasjonen var feil, noe som resulterte i RNase-rester, som påvirket nedstrøms RNA-eksperimentelle operasjoner, for eksempel in vitro-transkripsjon.

Anbefaling: Foregene series nukleinsyreisolasjonssett kan fjerne RNA uten ytterligere tilsetning av RNase,dermed bukkal vattpinne/FTA-kort DNA-isolasjonssettnødvendig't legg til RNase;sørg for å følge instruksjonene for buffer PW vaskerensekolonnen, og dette trinnet kan ikke utelates.

4. Etanolrest.

Analyse: Buffer WB utførte ikke sentrifugering med tomme rør etter vask av rensekolonnen.

Anbefaling: Utfør riktig sentrifugering av tomme rør i henhold til instruksjonene.

5. Annen urenhetsforurensning.

Analyse: Lagrede prøver eller spesialprøver er ikke forbehandlet.

Anbefaling: Forbehandle prøven grundig som anvist.