Vanlige spørsmål forAnimal Total RNA isolasjonssett

Følgende analyse av problemene du kan støte på idyrevev/celle-RNA-ekstraksjon will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

RNA ekstraheres ikke eller RNA-utbyttet er lavt

Det er ofte en rekke faktorer som påvirker utvinningseffektiviteten, for eksempel: RNA-innhold i vevsprøve, operasjonsmetode, elueringsvolum, etc.

1. Isbad eller kryogen (4 °C) sentrifugering ble utført under drift.

Anbefaling: Kjør ved romtemperatur (15-25 ° C) gjennom hele prosessen, ikke isbad og sentrifuger ved lave temperaturer.

2. Feil prøvekonservering eller overdreven prøvelagringstid.

Anbefaling: Oppbevar prøver ved -80 °C eller frys ned i flytende nitrogen og unngå gjentatt bruk av fryse-tine;prøv å bruke friskt vev eller dyrkede celler for RNA-ekstraksjon.

3. Utilstrekkelig prøvelysering.

Anbefaling: Ved homogenisering av vev, sørg for at vevet er tilstrekkelig homogenisert og at vevscellene er tilstrekkelig delt til å forklare frigjøringen av RNA.

4. Eluenten er ikke tilsatt riktig.

Anbefaling: Bekreft at RNase-Free ddH₂O tilsettes dråpevis til midten av rensekolonnemembranen.

5. Riktig volum absolutt etanol ble ikke tilsatt buffer RL2 eller buffer RW2.

Anbefaling: Følg instruksjonene, tilsett riktig volum absolutt etanol til Buffer RL2 og Buffer RW2 og bland godt før du bruker settet.

6. Dosering av vevsprøve er ikke hensiktsmessig.

Anbefaling: Bruk 10-20 mg vev eller (1-5) × 10⁶celler per 500 μl buffer RL1, da overdreven bruk av vev kan resultere i redusert RNA-ekstraksjon.

7. Feil elueringsvolum eller ufullstendig eluering.

Anbefaling: Elueringsvolumet til rensekolonnen er 50-200 μl;hvis elueringseffekten ikke er tilfredsstillende, anbefales det å forlenge plasseringstiden i romtemperatur etter tilsetning av forvarmet RNase-Free ddH₂O, f.eks. i 5-10 min.

8. Rensekolonnen har etanolrester etter buffer RW2-vask.

Anbefaling: Hvis det er etanolrester etter vask av buffer RW2, sentrifugering av tomme rør i 1 min, kan tiden for sentrifugering med tomme rør økes til 2 minutter, eller rensekolonnen kan plasseres ved romtemperatur i 5 minutter for å fjerne gjenværende etanol på en tilstrekkelig måte.

Renset RNA brytes ned

Kvaliteten på det rensede RNA er relatert til faktorer som bevaring av prøven, RNase-kontaminering og manipulasjon, etc.

1. Vevsprøver oppbevares ikke i tide.

Anbefaling: Hvis vevsprøver eller celler ikke brukes i tide etter innsamling, kryooppbevares umiddelbart ved -80 °C eller flytende nitrogen.For å trekke ut RNA, bruk en nylig tatt vev eller celleprøve når det er mulig.

2. Gjentatt fryse-tining av vevsprøver.

Anbefaling: Ved oppbevaring av vevsprøver er det best å kutte dem i små biter for konservering, og fjerne en av bitene ved bruk for å unngå gjentatt fryse-tining av prøven og nedbrytning av RNA.

3. RNase introduseres eller ikke bruker engangshansker, masker osv. under operasjonen.

Anbefaling: RNA-ekstraksjonseksperimenter utføres best i separate RNA-manipulasjonsrom og bordet ryddes før eksperimentet.

Bruk engangshansker og -masker under eksperimentet for å minimere RNA-nedbrytning forårsaket av introduksjon av RNase.

4. Reagenser er kontaminert med RNase under bruk.

Anbefaling: Bytt ut med et nytt Animal Total RNA Isolation Kit for relaterte eksperimenter.

5. Sentrifugerørene, spissene osv. som brukes i RNA-manipulering er kontaminert med RNase.

Anbefaling: Bekreft at sentrifugerørene, spissene, pipettene osv. som brukes i RNA-ekstraksjon, alle er RNase-frie.

Renset oppnådd RNA påvirker nedstrøms eksperimenter

RNA renset av rensekolonnen, hvis saltionene, proteininnholdet er for stort, vil påvirke nedstrømseksperimentet, for eksempel: omvendt transkripsjon, Northern Blot et al.

1. Det eluerte RNA har saltionrester.

Anbefaling: Bekreft at riktig volum av etanol er tilsatt buffer RW2 og utfør 2 rensekolonnevasker ved sentrifugalhastigheten som er angitt for drift;hvis det er rester av saltioner, la rensekolonnen stå i buffer RW2 i 5 minutter ved romtemperatur og utfør sentrifugering for å maksimere fjerning av saltforurensning.

2. Etanolrest i eluert RNA.

Anbefaling: Bekreft at etter vask med buffer RW2, utfør sentrifugeringsoperasjonen med tomme rør ved sentrifugeringshastigheten som er angitt for drift, øk tiden for sentrifugering av tomme rør til 2 minutter hvis det fortsatt er etanolrester, eller la det stå i romtemperatur i 5 minutter etter sentrifugering av tomme rør for å maksimere fjerningen av etanolrester.

Isolering av nullkeinsyreprøvetyper

Foregenes RNA-isolasjonssett kan oppnå total RNA-isolering/-ekstraksjon fra følgende prøvekilder: Dyrevev, plante, celler, viral, blod, etc.

Hvordan oppbevarer jeg settet

Oppbevaring i romtemperatur i 24 måneder.