RNase er et sensitivt ord som mange elever som ofte utfører RNA-ekstraksjonseksperimenter ikke ønsker å høre.Fullt bevæpnet ble RNA som til slutt ble ekstrahert med de svært giftige reagensene fenol og kloroform, nedbrutt.Jeg er ikke forsonet!!!I dag, la oss ta en titt på opprinnelsen til den berømte Rnase.

Ribonuklease (RNase), eller RNase, er en nuklease som kan hydrolysere RNA til små molekyler.RNase, som et lite molekylprotein, er uvanlig stabilt .Konvensjonell høytemperatur- og høytrykksdampsterilisering og proteinhemmere kan ikke deaktivere den fullstendig.Stabiliteten til RNase kommer hovedsakelig fra disulfidbindingene i strukturen.For eksempel har den ofte brukte RNase fra bovin bukspyttkjertel bare 124 aminosyrer, men inneholder 4 disulfidbindinger.Svovelbinding og disulfidbinding gir RNase utmerket termisk stabilitet.I tillegg har rnase en relativt liten molekylvekt og kan raskt gjenopprette sin opprinnelige konformasjon i mange tilfeller.

I tillegg til å være ekstremt stabil,RNaser er allestedsnærværende i laboratoriet .RNase er en biologisk forsvarsmekanisme.For en celle er eksogent RNA ofte dødelig.Sammenlignet med eksogent DNA er eksogent RNA ofte farligere.RNA blir gjerne transkribert og oversatt, så nesten alle organismer har utviklet RNaser for å forsvare seg mot invasjonen av eksogent RNA.Derfor utstråler bakteriecellene som dyrkes i laboratoriet og du som utvinner RNA aromaen av RNase.Menneskelige kroppsvæsker (spytt, tårer osv.) inneholder store mengder RNase, så ikke gråt når RNA brytes ned.Jo mer du gråter, jo verre blir RNA-nedbrytningen!!Søster Daiyu er ikke egnet for RNA-ekstraksjon!

I tillegg inneholder den sarte huden din også mye RNase, og markørene, pipettene, kjøleskapsdørene og dørhåndtakene som har blitt berørt av huden inneholder også RNase.

Med så mye vandring, la oss ta en titt på hvordan vi skal håndtere RNaser.

Det første som alle tenker på når de fjerner RNA erDEPC(dietylpyrokarbonat).DEPC denaturerer hovedsakelig proteinet ved å kombinere med imidazolringen til den RNase-aktive gruppen histidin, og hemmer dermed aktiviteten til enzymet.0,1 % DEPC kan ha en bedre fjerningseffekt på RNase, men vi må være oppmerksom på at DEPC er et kjent kreftfremkallende stoff, så spesiell oppmerksomhet bør vies når du bruker det.

For RNase må vi starte fra to aspekter,den første er å hemme aktiviteten til endogen RNase

Konvensjonelle RNA-ekstraksjonsreagenser som guanidinisotiocyanat og DTT inneholdt i Trizol kan åpne disulfidbindingen til RNase, men det er fortsatt noen RNaser, spesielt i vevsprøver, så vær oppmerksom på lav temperatur.

1.Senk umiddelbart vevsprøven i flytende nitrogen etter at den er tatt ut, eller i en kommersiell RNA-konserveringsløsning.

2.Etter å ha ekstrahert RNA fra celleprøven, legg den til lyseringsløsningen og lysér den på isboksen

3. Det er best å bruke flytende nitrogen til sliping når vevsprøver homogeniseres.Når du bruker en elektrisk homogenisator uten flytende nitrogen, vær oppmerksom på å forhåndskjøle homogenatadapteren.

Den andre er eksogen DNase

1.Vær fullt bevæpnet, bruk laboratoriefrakk, bruk maske, og sørg for å bruke et par nye hansker (ikke vær så sparsommelig!! Det skal bemerkes at Trizol er super etsende, og det er også veldig sterkt gjennom hansker, så ikke drypp på hendene).

2.Alle brukte pipettespisser, EP-rør, PCR-rør og annet utstyr må de-RNase-behandles.Den kan bløtlegges i 0,1 % DEPC og deretter settes under høyt trykk.Vær oppmerksom på operasjonen i et avtrekksskap.Lokale tyranner kan direkte kjøpe forbruksvarer for å fjerne enzymer.

PS: La meg fortelle deg en lat metode.Selv om høy temperatur og høyt trykk ikke kan fjerne RNase fullstendig, vil det fjerne en stor del av det.2 ganger høy temperatur og høyt trykk har god effekt, og ekstraksjonen av RNA har liten effekt.

3.Alkohol kan denaturere proteiner,så RNA-ekstraksjonstabellen kan tørkes med 75 % alkohol , og hansker kan også sprayes med alkohol.

4.Den endelige RNA-oppløsningen og sentrifugerøret bør også de-RNase-behandles.DEPC-vann er en vanlig RNA-oppløsningsløsning.La oss snakke om riktig tilberedningsmetode for DEPC-vann (husk å pakke om den kommersielle DEPC-en når du kjøper den)

Tilsett DEPC til ultrarent vann ved 1:1000, rist godt, la stå over natten ved 37 °C, og steriliser ved 121 °C under høy temperatur og høyt trykk i 15 minutter.DEPC-vann kan lagres ved -20 °C i 1 ml alikvoter.

Til slutt, for å oppsummere: lav temperatur er nøkkelen, forbruksvarer håndteres godt, fullt bevæpnet og mindre prat!

Vel, det er det for dagens strategi.Jeg ønsker deg all RNA-konsentrasjonen og renheten du nevnte.Begge A260/A280 er 2.0!!!

Selvfølgelig, hvis du bruker enromtemperatur drift RNA-ekstraksjonssett, kan det hende du ikke støter på problemene ovenfor.

Drift ved romtemperatur, uten tilsetning av DNase, ekstraherer totalt RNA fra celler på 11 minutter, og ekstraherer totalt RNA fra dyrevev eller planter på 30 minutter.

For prøveprøver, vennligst kontakt:overseas@foregene.com

Relaterte produkter:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/