Forfattere: Wang Xiaoyan, Zhao Eryu

Enhet: Jiaozhou sykehus, Dongfang sykehus tilknyttet Tongji University

For øyeblikket er den viktigste prøvetypen for påvisning av respiratorisk patogen nukleinsyre halsprøve.Det er mange typer vanlige prøvekonserveringsløsninger, som alle må kjøles eller fryses for transport og lagring;Det er vanskelig å kontrollere hele prosessen med lav temperatur under innsamlings- og transportprosessen, og det er vanskelig å sikre kvalitetskontrollen før prøvetesting^[1-2].

RNase (RNase) er en endonuklease som hydrolyserer RNA, hovedsakelig ved å kutte fosfodiesterbindinger mellom nukleotider.RNase-molekylet er veldig stabilt, det er disulfidbindinger i strukturen, og dets aktivitet krever ikke tilstedeværelse av toverdige kationer, så RNase denatureres ikke lett, og det er lett å renaturere selv etter høy temperatur eller bruk av denatureringsmidler.RNaser er delt inn i endogene og eksogene.De endogene RNasene kan frigjøres samtidig når cellene brister.Derfor er eliminering av rollen til endogene RNaser et svært kritisk trinn i RNA-ekstraksjonsprosessen.Eksogene RNaser er vidt distribuert.RNaser finnes i luften, menneskelig hud, hår og spytt, som er viktige årsaker til den enkle nedbrytningen av RNA^[3].

Dataspørring

CANS-CL02-A009 "Anvendelse av retningslinjer for medisinsk laboratoriekvalitet og kompetanseakkreditering innen feltet molekylær diagnose" i de tekniske kravene foreslår at passende vannkvalitetsstandarder skal formuleres i henhold til applikasjonen;Engangs lufttette beholdere:

RNase/klassifisering

(1) RNase A

Ribonuklease A (RNase A), avledet fra bovin bukspyttkjertel, er en endoribonuklease som spesifikt kan angripe 3′-enden av pyrimidinrester på RNA, og kutte cytosin eller uracil dannet av tilstøtende nukleotider.Fosfodiesterbinding, sluttproduktet av reaksjonen er et 3′ pyrimidinnukleotid og et oligonukleotid med et 3′ pyrimidinnukleotid på slutten.

(2) RNase T1

Ribonuklease T1 (RNase T1) er avledet fra Aspergillus orjzae, den virker spesifikt på det 3'-terminale fosfatet til guanin, og spaltningsstedet er mellom 3'-fosfatet til guanin og 5'-hydroksylet til tilstøtende nukleotider.Sluttproduktet av reaksjonen er 3'guanylsyre og oligonukleotidfragmenter med 3'guanylsyre på slutten.

(3) RNase H

Ribonuklease H (RNase H) ble først oppdaget fra kalvethymusvev, og dets kodende gen har blitt klonet inn i Escherichia coli.Det kan spesifikt bryte ned DNA: RNA-tråder i RNA-hybridduplekser, noe som resulterer i oligonukleotider og mononukleotider med 3'-OH og 5'-monofosfatender, det kan ikke bryte ned enkelt- eller dobbelttrådet DNA eller RNA.

RNase

Funksjon og bruk

Ribonuklease kan katalysere nedbrytningen av ribonukleinsyre (RNA) og kan syntetiseres kunstig.Medisinsk salve brukes lokalt for å behandle traumer og leddsmerter.Ifølge rapporter kan ribonuklease endre vertscellemetabolisme, hemme virussyntese, hemme spredning av influensavirus in vitro og hemme dannelsen av vaccinia- og herpesvirus i kyllingembryoer.Klinisk bruk av ribonuklease daglig intramuskulær injeksjon på 180 mg, gunstig for behandling av epidemisk encefalitt, ribonuklease kan katalysere nedbrytningen av ribonukleinsyre (RNA), og kan nå syntetiseres kunstig.Medisinsk salve brukes lokalt for å behandle traumer og leddsmerter.Ifølge rapporter kan ribonuklease endre vertscellemetabolisme, hemme virussyntese, hemme spredning av influensavirus in vitro og hemme dannelsen av vaccinia- og herpesvirus i kyllingembryoer.Klinisk bruk av ribonuklease daglig intramuskulær injeksjon på 180 mg er fordelaktig for behandling av epidemisk encefalitt.

RNase

Inhibitor Definisjon

Definisjon av RNase-hemmerenhet: Mengden enzym som kreves for å hemme 50 % av aktiviteten til 5ng RNase A er én enhet.

Hvordan RNase-hemmere virker

Guanidin isotiocyanat:

Guanidin isothiocyanat er en organisk forbindelse med molekylformelen C2H6N4S.Hovedsakelig brukt i biologisk medisin, kjemiske reagenser osv. Guanidinisotiocyanat er et proteinlyseringsmiddel, og det brukes ofte som hovedkomponenten i lyseringsløsning i molekylærdiagnostiske reagenser.Det kan lysere vev, ødelegge cellestruktur og dissosiere nukleinsyre fra nukleoprotein, og har sterk denaturering til RNase.Det er den mest effektive RNase-hemmeren for tiden.

TRIzol er et nytt total-RNA-ekstraksjonsreagens som direkte kan trekke ut totalt RNA fra celler eller vev.Den inneholder stoffer som fenol og guanidin isotiocyanat, som raskt kan forstyrre celler og hemme nukleaser frigjort av celler.

(Men guanidin isothiocyanat er farlig for laboratorieforskernes helse.)

RNAsin:

Surt glykoprotein ekstrahert fra rottelever eller human blastoderm.Rnasin er en ikke-konkurrerende hemmer av RNase, som kan binde seg til ulike RNaser for å inaktivere dem.

(Flere detaljer: https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hhøy temperatur:

Høy temperatur er også et vanlig middel for proteindenaturering.

Dietylpyrokarbonat (DEPC):

DEPC er en sterk, men ufullstendig RNase-hemmer, som kan hemme RNase-aktivitet ved å kombinere med aminosyre-imidazolringen i den aktive RNase-gruppen for å denaturere proteiner.

Vanadylribonukleosidkompleks:

Et kompleks dannet av vanadiumoksidioner og nukleosider, som binder seg til RNase i form av overgangsstoffer, som nesten fullstendig kan hemme aktiviteten til RNase

annen:

SDS, urea, diatoméjord osv. har også en viss hemmende effekt på RNase.

Ekspertanmeldelser

Li Yujie sjefstekniker

Direktør for laboratorieavdelingen, Jiaozhou sykehus, Dongfang sykehus tilknyttet Tongji University

For å forhindre biologisk nedbrytning av eksogen RNase, bør masker, hansker og luer brukes og skiftes ut ofte under RNA-ekstraksjonsprosessen.Alt glass skal stekes i tørkeovn ved 200°C i mer enn 2 timer.Materialer som brukes til baking, for eksempel plast, må behandles med DEPC-vann, og deretter vaskes med destillert vann.Reagensene eller enhetene som brukes til ekstraksjon, konservering og identifikasjon av RNA bør være dedikert til RNA, og et uavhengig RNA-operasjonsområde bør settes opp.

referanser:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al.Bakterier og virus i nasopharynx rett før utbruddet av akutte nedre luftveisinfeksjoner hos urfolk i australske barn [J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[2] Hospital Infection Control Branch of Chinese Preventive Medicine Association.Retningslinjer for innsamling og inspeksjon av kliniske mikrobielle prøver [J].Chinese Journal of Hospital Infection, 2018(20):3192-3200.

[3] "Klinisk test ti tusen hvorfor molekylærbiologitestvolum"