-
RT-PCR eksperimentell reaksjonssystem optimaliseringsmetode detaljert sammendrag
一、Øk reaksjonssystemets følsomhet： 1. Isoler RNA av høy kvalitet： Vellykket cDNA-syntese kommer fra RNA av høy kvalitet.RNA av høy kvalitet bør minst være i full lengde og fri for revers transkriptasehemmere som EDTA eller SDS.Kvaliteten på RNA bestemmer den maksimale a...Les mer -
Komplett PCR-primerdesign og PCR-detaljer
Primer design basis (99% problemer kan løses) 1. Primer lengde: Læreboken krever 15-30bp, vanligvis ca 20bp.Den faktiske tilstanden er bedre å være 18-24bp for å sikre spesifisiteten, men jo lengre jo bedre, for lang primer vil også redusere spesifisiteten, og redusere utbyttet.2. Prim...Les mer -
Forholdsregler for qRT-PCR utarbeidet av seniorlege møysommelig
Alle snakker om prinsippet for qRT-PCR-eksperiment, primerdesign, resultattolkning osv., men jeg tror jeg bør dele med deg den eksperimentelle driften av qRT-PCR.Det er lite, men det handler om resultater.Før vi gjør qRT-PCR, må vi ha en klar forståelse av våre ...Les mer -
Forholdsregler for RT-qPCR
RT-qPCR-eksperiment inkluderer RNA-ekstraksjon og kvalitetsvurdering, revers transkripsjon og qPCR tre trinn, hvert trinn har mange forholdsregler, vi vil introdusere i detalj nedenfor.Ⅰ.RNA-kvalitetsvurdering I RT-qPCR-eksperiment, etter fullføring av RNA-ekstraksjon, ...Les mer -
En grundig introduksjon til sanntids PCR
1. Innledende forståelse På dette stadiet må vi forstå noen konsepter og terminologi, for å unngå å gjøre feil foran våre seniorer, for eksempel: Q: Hva er forskjellen mellom RT-PCR, qPCR, sanntids PCR, og sanntids RT-PCR?Svar: RT-PCR er revers transkripsjons-PCR (revers t...Les mer -
PCR, multippel PCR, In situ PCR, Revers PCR, RT-PCR, qPCR（1）– PCR
PCR, multippel PCR, In situ PCR, Revers PCR, RT-PCR, qPCR（1）– PCR Vi vil sortere ut konseptene, trinnene og detaljene for ulike PCR Ⅰ.PCR Polymerase Chain Reaction, referert til som PCR, er en molekylærbiologisk teknologi som brukes til å forstørre spesifikke DNA-fragmenter.Det kan betraktes som en...Les mer -
qRT-PCR eksperimentelt prinsipp
RT-qPCR er utviklet fra vanlig PCR-teknologi.Den legger til fluorescerende kjemikalier (fluorescerende fargestoffer eller fluorescerende prober) til det tradisjonelle PCR-reaksjonssystemet, og oppdager PCR-glødings- og forlengelsesprosessen i sanntid i henhold til deres forskjellige luminescerende mekanismer.Fluorescerende tegn...Les mer -
RT-PCR eksperimentell reaksjonssystem optimaliseringsmetode detaljert sammendrag
Ⅰ.Øk reaksjonssystemets følsomhet: 1. Separer RNA av høy kvalitet: Vellykket cDNA-syntese kommer fra RNA av høy kvalitet.RNA av høy kvalitet bør sikre minst en total lengre og inneholder ikke hemmere som ikke inneholder registreringsenzymer, som EDTA eller SDS.Kvaliteten...Les mer -
Hvordan sikre et rimelig utvalg av Ct-verdier for qPCR-eksperimenter
Ct-verdi er den viktigste resultatpresentasjonsformen for fluorescerende kvantitativ PCR.Den brukes til å beregne genuttrykksforskjeller eller genkopinummer.Så hva anses Ct-verdien for fluorescenskvantifisering som rimelig?Hvordan sikre det effektive området for Ct-verdi?Hva er Ct...Les mer -
Vær oppmerksom på følgende detaljer for å doble suksessraten for RT-qPCR-eksperimentet ditt!
RT-qPCR er det grunnleggende eksperimentet innen molekylærbiologi, og alle må være kjent med det.Den inkluderer hovedsakelig tre trinn: RNA-ekstraksjon, revers transkripsjon til cDNA og sanntids fluorescerende kvantitativ PCR.Det hjelper ikke, hva skjer?Det er sannsynlig at det er et problem med...Les mer -
RNA-ekstraksjon, 260/230 er spesielt lav, og ct-verdien for pcr-kjøring er svært høy.Hvordan løse det?
Det lave forholdet mellom A260/A230 er vanligvis forårsaket av urenheter med maksimal absorpsjonsbølgelengde ved 230 nm.La oss se hva disse urenhetene inkluderer: Vanlige forurensninger Absorpsjonsbølgelengde Ratioeffekt Protein ~230nm og 280nm Samtidig reduksjon av A 260 /A 280 og A 260 /A ...Les mer -
Fluorescerende kvantitativ PCR (qPCR) – primerdesign
I qPCR-eksperimenter er primerdesign også en svært viktig kobling.Hvorvidt primerne er egnet eller ikke er nært knyttet til om amplifikasjonseffektiviteten når standarden, om de amplifiserte produktene er spesifikke, og om de eksperimentelle resultatene er tilgjengelige.Så hvordan lage...Les mer
-
Telefon
-
E-post
-
Hva skjer
Hva skjer
-
Topp