Cell Direct RT qPCR-sett—SYBR GRØN I Direkte cellelysecelleklare Ett-trinns qRT-PCR-sett
Beskrivelser
Dette settet bruker et unikt lyseringsbuffersystem som raskt kan frigjøre RNA fra dyrkede celleprøver for RT-qPCR-reaksjoner, og dermed eliminere den tidkrevende og arbeidskrevende RNA-renseprosessen.RNA-malen kan fås på bare 7 minutter.Den 5×Direct RT Mix og 2×Direkte qPCR Mix-SYBR-reagenser levert av settet kan raskt og effektivt oppnå kvantitative PCR-resultater i sanntid.
5×Direct RT Mix og 2×Direct qPCR Mix-SYBR har sterk inhibitortoleranse, og lysatet til prøvene kan brukes som mal for RT-qPCR direkte.Dette settet inneholder den unike RNA høyaffinitet Foregene revers transkriptase, og Hot D-Taq DNA polymerase, dNTPs, MgCl2, reaksjonsbuffer, PCR-optimalisering og stabilisator.
Spesifikasjoner
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Komponenter i sett
| Del I | Buffer CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Buffer ST | |
| Del II | DNA viskelær |
| 5× Direct RT Mix | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | |
| 50× ROX Reference Dye | |
| RNase-fri ddH2O | |
| Bruksanvisning | |
Egenskaper og fordeler
■Enkelt og effektivt: med Cell Direct RT-teknologi kan RNA-prøver fås på bare 7 minutter.
■ Prøvebehovet er lite, så lite som 10 celler kan testes.
■ Høy gjennomstrømning: den kan raskt oppdage RNA i celler dyrket i 384, 96, 24, 12, 6-brønns plater.
■ DNA Eraser kan raskt fjerne frigjorte genomer, redusere effekten på etterfølgende eksperimentelle resultater.
■ Optimalisert RT- og qPCR-system gjør to-trinns RT-PCR revers transkripsjon mer effektiv og PCR mer spesifikk og mer motstandsdyktig mot RT-qPCR-reaksjonshemmere.
Sett-applikasjon
Anvendelsesområde: dyrkede celler.
- RNA frigitt ved prøvelysis: gjelder kun for RT-qPCR-malen til dette settet.
- Settet kan brukes til følgende formål: genekspresjonsanalyse, verifisering av siRNA-mediert gendempende effekt, medikamentscreening, etc.
Diagram
Lagring og holdbarhet
Del I av dette settet bør oppbevares ved 4 ℃;Del II bør lagres ved -20 ℃.
Foregene Protease Plus II bør oppbevares ved 4℃, ikke frys ved -20 ℃.
Reagens 2×Direct qPCR Mix-SYBR bør lagres ved -20℃i mørket;hvis den brukes ofte, kan den også lagres ved 4℃ for korttidslagring (bruk opp innen 10 dager).
Real Time PCR primer designprinsipper
Forward Primer og Reverse Primer
For sanntids PCR er primerdesign veldig viktig.Primere er relatert til spesifisiteten og effektiviteten til PCR-amplifikasjon, og kan utformes med referanse til følgende prinsipper:
Primerlengde: 18-30bp.
GC-innhold: 40-60%.
Tm-verdi: Primer-designprogramvare, som Primer 5, kan gi Tm-verdien til primeren.Tm-verdiene til oppstrøms og nedstrøms primere bør være så nærme som mulig.Tm-beregningsformelen kan også brukes: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Når du utfører PCR, velges vanligvis en temperatur under primerens Tm-verdi på 5 °C som annealingstemperatur (den tilsvarende økningen i annealingstemperaturen kan øke spesifisiteten til PCR-reaksjonen).
Primere og PCR-produkter:
Design primer PCR amplifikasjonsproduktlengde er fortrinnsvis 100-150 bp.
Designprimere i det sekundære strukturelle området av malen bør unngås så mye som mulig.
Unngå dannelsen av 2 eller flere komplementære baser mellom 3′-endene av oppstrøms- og nedstrømsprimere.
Primer 3′ terminalbase kan ikke være til stede med 3 ekstra påfølgende G eller C.
Primerne i seg selv kan ikke ha komplementære strukturer, ellers vil det dannes en hårnålsstruktur som påvirker PCR-amplifisering.
ATCG bør fordeles så jevnt som mulig i primersekvensen, og den 3′ terminale basen bør unngås som T.
Vedlegg 1：Cell Direct RT-qPCR Kit-komponenttilleggspakke
1.Cellelyseløsning
|
| |||
| Komponenter i sett (24-brønners lysesystem / brønn) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| DelJeg | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| DelII | DNA viskelær | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT Bland
|
| |
| Komponenter i sett (20 μl reaksjonssystem) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| RNase-fri ddH2O | 1,7 ml × 2 |
|
| ||
| Komponenter i sett (20 μl reaksjonssystem) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 50× ROX Reference Dye | 40 μl | 200 μl |
| RNase-fri ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Bruksanvisninger:
