Sanntids PCR Easyᵀᴹ-Taqman
Kitbeskrivelser
2X Real PCR EasyTMMix-Taqman levert av Real Time PCR EasyTM-Taqman-settet er et nytt premix-system som bruker spesifikke fluorescerende prober for sanntids PCR-amplifikasjonsreaksjoner, noe som i stor grad kan forbedre produktspesifisiteten og reaksjonssensitiviteten.ROX leveres som internkontrollfargestoff.
2X Ekte PCR EnkelTMMix-Taqman inneholder Foregenes unike hot-start Taq DNA Polymerase.Sammenlignet med vanlige Taq-enzymer har den fordelene med høy amplifikasjonseffektivitet, sterk spesifikk amplifikasjonsevne og lav mismatchhastighet.Det kan redusere uspesifikk forsterkning og forbedre nøyaktigheten av PCR.
Spesifikasjoner
Sanntids PCR EnkelTM-Taqman | ||||
Settsammensetning (20 μl system) | QP-01021 | QP-01022 | QP-01023 | QP-01024 |
200T | 500T | 1000T | 2000T | |
2×Ekte PCRLettTMBlande-Taqman | 1 ml ×2 | 1.7 ml ×3 | 1.7 ml ×6 | 1.7 ml ×12 |
20×ROX Reference Dye | 200 μl | 0,5ml | 1 ml | 1 ml × 2 |
DNase-fri ddH2O | 1,7 ml | 1.7 ml ×2 | 10 ml | 20 ml |
Iinstruksjon | 1 | 1 | 1 | 1 |
Egenskaper og fordeler
■ Enkel – 2X PCR-blanding for å redusere eksperimentelle feil og driftstid
■ Spesifikt – optimalisert buffer og hot-start Taq-enzym kan forhindre uspesifikk amplifikasjon og dannelse av primerdimer
■ Høy følsomhet – kan oppdage lave kopier av malen
■ God allsidighet – kompatibel med de fleste kvantitative PCR-instrumenter i sanntid
Påføring av sett
qPCR-analyse
Arbeidsflyt
Grafisk
Lagring og holdbarhet
Dette settet bør oppbevares vekk fra lys og bør oppbevares ved -20 ℃.Hvis den brukes ofte, kan den også lagres ved 4 ℃ i en kort periode (10 dager).
Ingen forsterkningssignaler
1. Taq DNA-polymerase i settet mister sin aktivitet på grunn av feil oppbevaring eller utløp av settet.
Anbefaling: Bekreft oppbevaringsforholdene for settet;legg til en passende mengde Taq DNA-polymerase på nytt i PCR-systemet eller kjøp et nytt Real Time PCR-sett for relaterte eksperimenter.
2. Det er mange hemmere av Taq DNA-polymerase i DNA-malen.
Forslag: Rens malen på nytt eller reduser mengden mal som brukes.
3. Mg2+-konsentrasjonen er ikke egnet.
Anbefaling: Mg2+ konsentrasjonen av 2× Real PCR Mix vi tilbyr er 3,5 mM.For noen spesielle primere og maler kan imidlertid Mg2+-konsentrasjonen være høyere.Derfor kan du tilsette MgCl2 direkte for å optimalisere Mg2+-konsentrasjonen.Det anbefales å øke Mg2+ 0,5 mM hver gang for optimalisering.
4. PCR-amplifikasjonsbetingelsene er ikke egnet, og primersekvensen eller konsentrasjonen er feil.
Forslag: bekreft riktigheten av primersekvensen og primeren har ikke blitt degradert;Hvis forsterkningssignalet ikke er bra, prøv å senke annealingstemperaturen og juster primerkonsentrasjonen på riktig måte.
5. Mengden mal er for liten eller for mye.
Anbefaling: Utfør mallineariseringsgradientfortynning, og velg malkonsentrasjonen med den beste PCR-effekten for sanntids PCR-eksperiment.
NTC har for høy fluorescensverdi
1.Reagenskontaminering forårsaket under drift.
Anbefaling: Bytt ut med nye reagenser for sanntids PCR-eksperimenter.
2. Forurensning skjedde under fremstillingen av PCR-reaksjonssystemet.
Anbefaling: Ta nødvendige beskyttelsestiltak under drift, som: bruk av latekshansker, bruk av pipettespiss med filter, etc.
3. Primerne brytes ned, og nedbrytningen av primerne vil forårsake uspesifikk amplifikasjon.
Forslag: Bruk SDS-PAGE-elektroforese for å oppdage om primerne er degradert, og erstatt dem med nye primere for sanntids PCR-eksperimenter.
Primer dimer eller ikke-spesifikk amplifikasjon
1. Mg2+-konsentrasjonen er ikke egnet.
Anbefaling: Mg2+ konsentrasjonen til 2× Real PCR EasyTM Mix vi tilbyr er 3,5 mM.For noen spesielle primere og maler kan imidlertid Mg2+-konsentrasjonen være høyere.Derfor kan du tilsette MgCl2 direkte for å optimalisere Mg2+-konsentrasjonen.Det anbefales å øke Mg2+ 0,5 mM hver gang for optimalisering.
2. PCR-glødetemperaturen er for lav.
Forslag: Øk PCR-glødingstemperaturen med 1 ℃ eller 2 ℃ hver gang.
3.PCR-produktet er for langt.
Anbefaling: Lengden på sanntids PCR-produktet bør være mellom 100-150 bp, ikke mer enn 500 bp.
4. Primerne brytes ned, og nedbrytningen av primerne vil føre til utseendet til spesifikk amplifikasjon.
Forslag: Bruk SDS-PAGE-elektroforese for å oppdage om primerne er degradert, og erstatt dem med nye primere for sanntids PCR-eksperimenter.
5. PCR-systemet er feil, eller systemet er for lite.
Forslag: PCR-reaksjonssystemet er for lite vil føre til at deteksjonsnøyaktigheten reduseres.Det er best å bruke reaksjonssystemet anbefalt av det kvantitative PCR-instrumentet for å kjøre Real Time PCR-eksperimentet på nytt.
Dårlig repeterbarhet av kvantitative verdier
1. Instrumentet fungerer ikke.
Forslag: Det kan være feil mellom hvert PCR-hull i instrumentet, noe som resulterer i dårlig reproduserbarhet under temperaturstyring eller deteksjon.Vennligst sjekk i henhold til instruksjonene til det tilsvarende instrumentet.
2. Prøvens renhet er ikke god.
Anbefaling: Urene prøver vil føre til dårlig reproduserbarhet av eksperimentet, som inkluderer renheten til malen og primere.Det er best å rense malen på nytt, og primerne renses best med SDS-PAGE.
3. Forberedelses- og lagringstiden for PCR-systemet er for lang.
Forslag: Bruk Real Time PCR-systemet for PCR-eksperiment umiddelbart etter klargjøring, og ikke la det stå til side for lenge.
4. PCR-amplifikasjonsbetingelsene er ikke egnet, og primersekvensen eller konsentrasjonen er feil.
Forslag: bekreft riktigheten av primersekvensen og primeren har ikke blitt degradert;Hvis forsterkningssignalet ikke er bra, prøv å senke annealingstemperaturen og juster primerkonsentrasjonen på riktig måte.
5. PCR-systemet er feil, eller systemet er for lite.
Forslag: PCR-reaksjonssystemet er for lite vil føre til at deteksjonsnøyaktigheten reduseres.Det er best å bruke reaksjonssystemet anbefalt av det kvantitative PCR-instrumentet for å kjøre Real Time PCR-eksperimentet på nytt.