Lede

Langt ikke-kodende RNA, lncRNA er et ikke-kodende RNA med en lengde større enn 200 nukleotider, vanligvis mellom 200-100000 nt.lncRNA regulerer genuttrykk på epigenetisk, transkripsjons- og post-transkripsjonelt nivå, og deltar i X-kromosomdemping, genomimprinting og kromatinmodifikasjon, transkripsjonsaktivering, transkripsjonsinterferens, kjernetransport, cellesyklusregulering, celledifferensieringsregulering, og dosekompensasjonseffekter som forekommer i nærhet av andre viktige kompensasjonseffekter (Dosering og kompensasjonseffekter) ion av menneskelige sykdommer, og er for tiden en av hot spots innen biomedisin.

01  Typer og egenskaper ved LncRNA

lncRNA er delt inn i mange typer i henhold til de forskjellige kildene til dannelsen, som vist i figuren ovenfor.Har følgende egenskaper:

1. lncRNA er vanligvis lengre, med dynamisk uttrykk og forskjellige spleisemetoder under differensiering
2. Sammenlignet med kodende gener har lncRNA vanligvis et lavere ekspresjonsnivå
3. De fleste lncRNA-er har åpenbar tidsmessig og romlig ekspresjonsspesifisitet i prosessen med vevsdifferensiering og utvikling
4. Det er karakteristiske uttrykk i svulster og andre sykdommer
5. De subcellulære plasseringene til lncRNA er forskjellige
6. Rekkefølgen er lav i bevaring, men funksjonen har en viss grad av bevaring mv.

02 Ofte stilte spørsmål om LncRNA omvendt transkripsjon

På grunn av det lave innholdet av lncRNA i celler, lang lengde og struktur på høyt nivå, har slikt RNA ofte komplekse strukturer som stammeløkker eller hårnåler, og RT-qPCR er utsatt for problemer med mislykket revers transkripsjon eller lav effektivitet.

03 LncRNA revers transkripsjonsløsning

I den sentrale regelen kalles prosessen med RNA-virus som bruker sin egen revers transkriptase for å syntetisere DNA ved å bruke RNA som mal revers transkripsjon.Prosessen med å bruke RNA-virus revers transkriptase for å syntetisere cDNA-mal in vitro kalles revers transkripsjon.Hovedelementene inkludert i revers transkripsjonssystemet: RNA-template, revers transkriptase, primere og andre komponenter.

1.RNA-mal

Påvirkningen av RNA-mal på revers transkripsjon gjenspeiles i struktur, renhet og integritet.Jo høyere renheten og integriteten til det ekstraherte RNAet er, desto høyere effektivitet er revers transkripsjon og desto mer nøyaktige blir de påfølgende kvantitative resultatene.RNA renset med vanlig brukte RNA-ekstraksjonsreagenser inneholder ofte rester av alkohol og guanidinsalter, som har en sterk hemmende effekt på de fleste revers transkriptaser.

2.Revers transkriptase

Revers transkriptase har en sentral innflytelse i hele revers transkripsjonssystemet.Den passende temperaturen for revers transkriptasen som brukes i de fleste laboratorier er vanligvis 42°C.Faktisk krever åpningen av RNA-strukturen på høyt nivå en høyere temperatur, og kravene til revers transkriptase er høyere.

3.Primer

Revers transkripsjonsprimere inkluderer genspesifikke primere, tilfeldige primere og Oligo dT-primere.De fleste lncRNA-er inneholder ikke polyA-haler, og det er viktig å matche de tilfeldige primerne riktig med Oligo dT.

4.Andre komponenter

I lys av det faktum at RNA er spesielt lett å bryte ned, kan introduksjonen av komponenter i revers transkripsjonssystemet minimeres, noe som effektivt kan forhindre inntreden av RNase og sikre jevn fremgang av revers transkripsjon.

Foregenehenter fra RNA-template, revers transkripsjon til qPCR

Omfattende eskorter lncRNA-deteksjonen din

Animal Total RNA IsolasjonSett (med kolonne for fjerning av gDNA)

Celle totalt RNA IsolasjonSett (med kolonne for fjerning av gDNA)

Lnc-RT HeroTM I(Med gDNase)(Super Premix for førstestrengs cDNA-syntese fra lncRNA)

Sanntids PCR EasyTM-SYBR Grønn I

Afordeler ofRNA-ekstraksjon:

Settet bruker tredje generasjons RNA-ekstraksjonsteknologi, det er ikke nødvendig å bruke DNase.

11 minutter fra 96, 24, 12 og 6-brønners platedyrkede celler, høyeffektiv ekstraksjon av gDNA-fri, høy renhet, høykvalitets totalcelle-RNA.

Fordeler med lncRNA revers transkripsjon:

Et omvendt transkripsjonssystem spesielt utviklet for LncRNA for raskt å fjerne genomisk DNA-forurensning.

Revers transkripsjonssystemet har høy termisk stabilitet og har fortsatt god revers transkripsjonsytelse ved 50°C.

Maler med høyt GC-innhold og kompleks sekundærstruktur kan reverseres med høy effektivitet.

Fordelerof qPCR:

Varmstart Foregene Taq Polymerase har høyere amplifikasjonseffektivitet, høyere amplifikasjonsfølsomhet og høyere amplifikasjonsspesifisitet

Den optimaliserte Real PCR Easy Mix gjør at SYBR Green I har høyere deteksjonsfølsomhet, og dens fluorescensintensitet er 3-5 ganger høyere enn tilsvarende produkter, som kan møte behovene til forskjellige typer kvantitative fluorescenseksperimenter.