W:Bror, den omvendte transkripsjonen er fullført, og til slutt det siste trinnet – fluorescerende kvantitativ PCR!Hei, bror, hva er sanntids kvantitativ PCR?
M:PCR vet du alltid, ikke sant?
W: Du vet, PCR er polymerasekjedereaksjonen, og det er en teknologi som øker DNA!
M: Det er nesten... Det er en teknisk metode for å amplifisere målsekvensen til mer enn én million ganger gjennom spesifikke primere, men dette indikerer bare tilstedeværelsen eller fraværet av målsekvensen, og kan ikke bestemme mengden av den opprinnelige malen.Fluorescens kvantitativ PCR er en teknisk metode utviklet for å løse dette problemet.Sanntids PCR og mengde PCR (qPCR) refererer vanligvis til det.
W: Forskjellen fra vanlig PCR ligger i fluorescenskvantifisering?
M: Ja, det vil si, i forlengelsesstadiet av hver PCR-syklus, detekteres fluorescenssignalintensiteten, og den innledende malmengden kan beregnes i henhold til endringen i signalintensiteten.
W: Det føles så komplisert!Må jeg beregne dette selv?
M: Dette krever at du lærer sakte, det er best å kunne forstå prinsippet.Nå kan du først fokusere på CT-verdien, som er relativt intuitive eksperimentelle data, og størrelsen tilsvarer størrelsen på den opprinnelige malmengden.Det finnes også grafer som amplifikasjonskurver og smeltekurver.De har det siste ordet om eksperimentet ditt er vellykket eller ikke.
W: Å, bror.Da skal jeg gjøre qPCR-eksperimentet!
M: Vær spesielt oppmerksom på ikke å legge til maler i reagensområdet, ellers vil din ubrukte blanding lett bli forurenset!
W: Skjønner!

Real Time PCR Easyᵀᴹ-SYBR Green I Kit

Høyere effektivitet, større spesifisitet
Høy følsomhet, god kompatibilitet